[发明专利]一种高效提取干细胞因子的方法

说明书

本发明涉及到一种细胞提取方法，尤其涉及到一种高效提取干细胞因子的方法。该高效提取干细胞因子的方法使用1毫米长枪头将人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸后，在显微镜下观察，取大小合适的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，完成人工诱导多能性干细胞的分割，可以进行传代。高效提取干细胞因子的方法，需要的细胞培养基较少，能大大降低细胞传代过程中的成本；通过1毫米长枪头的吸吹气对人工诱导多能性干细胞，大大降低了，人工诱导多能性干细胞分割过程的难度，提高了提取干细胞因子的效率。

技术领域

本发明涉及到一种细胞提取方法，尤其涉及到一种高效提取干细胞因子的方法。

背景技术

诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells iPS）是2006年日本京都大学Shinya Yamanaka在世界著名学术杂志《细胞》上率先报道了诱导多能干细胞的研究。他们把Oct3/4,Sox2、c-Myc和Klf4这四种转录因子基因克隆入病毒载体，然后引入小鼠成纤维细胞，发现可诱导其发生转化，产生的iPS细胞在形态、基因和蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等方面都与胚胎干细胞相似。

iPS干细胞的出现，在干细胞研究领域、表观遗传学研究领域以及生物医学研究领域都引起了强烈的反响，这不仅是因为它在基础研究方面的重要性，更是因为它为人们带来的光明的应用前景。

在基础研究方面，它的出现，已经让人们对多能性的调控机制有了突破性的新认识。细胞重编程是一个复杂的过程，除了受细胞内因子调控外，还受到细胞外信号通路的调控。对于Oct4、Sox2和Nanog等维持于细胞自我新能力的转录因子的研究正在逐渐地展开；利用iPS干细胞作为实验模型，只操纵几个因子的表达，这更会大大加速对多能性调控机理的深入研究。

在实际应用方面，iPS干细胞的获得方法相对简单和稳定，不需要使用卵细胞或者胚胎。这在技术上和伦理上都比其他方法更有优势，iPS干细胞的建立进一步拉近了干细胞和临床疾病治疗的距离，iPS干细胞在细胞替代性治疗以及发病机理的研究、新药筛选方面具有巨大的潜在价值。

此外，iPS干细胞在神经系统疾病、心血管疾病等方面的作用也日益呈现，iPS干细胞在体外已成功地被分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等。在临床疾病治疗中具有巨大应用介值。

与经典的胚胎干细胞技术和体细胞核移植技术不同，iPS技术不使用胚胎细胞或卵细胞，因此没有伦理学的问题。利用iPS技术可以用病人自己的体细胞制备专有的干细胞，所以不会有免疫排斥的问题。

本发明涉及的一种高效提取干细胞因子的方法，该方法使用1毫米长枪头将人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸后，在显微镜下观察，取大小合适的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，完成人工诱导多能性干细胞的分割，可以进行传代。高效提取干细胞因子的方法，需要的细胞培养基较少，能大大降低细胞传代过程中的成本；通过1毫米长枪头的吸吹气对人工诱导多能性干细胞，大大降低了，人工诱导多能性干细胞分割过程的难度，提高了人工诱导多能性干细胞分割效率和传代成功率。

发明内容

1.为了克服背景技术中存在的缺陷，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种高效提取干细胞因子的方法，其特征在于其步骤为：

（1）将人工诱导多能性干细胞放置在直经为8.55厘米的细胞培养皿内培养，使得人工诱导多能性干细胞覆盖掉细胞培养皿底面积的85%；

（2）将步骤（1）所述细胞培养皿中的培养基吸出，使用1-3毫升磷酸盐缓冲液（PBS）对细胞培养皿进行清洗，然后将磷酸盐缓冲液吸出；

（3）向细胞培养皿中加入0.5-1毫升细胞分裂素（CTK）后摇均匀，常温下静止30-120秒，在此期间，至少拍打细胞培养皿一次；