[发明专利]一种提高基因突变检测灵敏度的方法在审
| 申请号： | 201810899234.2 | 申请日： | 2018-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN108998504A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 鲍伟胜;王春雷 | 申请（专利权）人： | 鲍伟胜;王春雷 |
| 主分类号： | C12Q1/6827 | 分类号： | C12Q1/6827 |
| 代理公司： | 合肥天明专利事务所(普通合伙) 34115 | 代理人： | 赵瑜;奚华保 |
| 地址： | 加拿大安大略*** | 国省代码： | 加拿大;CA |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 富集 基因突变检测 突变型基因 灵敏度 突变型 突变基因位点 特异性引物 测序 杂交 变性和复性 野生型基因 前向引物 延伸反应 靶向DNA 传统的 核酸 延伸 | ||
1.一种提高基因突变检测灵敏度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、靶向DNA序列的PCR扩增；
S2、扩增后PCR产物的纯化；
S3、利用突变型特异性引物对纯化后扩增PCR产物进行延伸；
S4、对延伸后的突变型基因DNA片段进行杂交和富集。
2.根据权利要求1所述的一种提高基因突变检测灵敏度的方法，其特征在于：步骤S2所述PCR产物的纯化方法为使用核酸外切酶I降解任何剩余的PCR引物或者使用市售PCR产物的纯化试剂盒。
3.根据权利要求1所述的一种提高基因突变检测灵敏度的方法，其特征在于：步骤S3中所述延伸反应体系中仅加入突变型的前向引物和未标记的dNTPs。
4.根据权利要求1所述的一种提高基因突变检测灵敏度的方法，其特征在于：步骤S4中所述突变型基因DNA片段的杂交是指，将带有突变型引物的突变型基因DNA片段固定在固态物质上。
5.根据权利要求4所述的一种提高基因突变检测灵敏度的方法，其特征在于：所述杂交方式包括在突变型引物与待混合的固态物质上分别加Tag与抗-Tag片段序列；或者在突变型引物与待混合的固态物质上分别加链霉亲和素与生物素。
6.根据权利要求1或4所述的一种提高基因突变检测灵敏度的方法，其特征在于：步骤S4中所述突变型基因DNA片段的富集是指，将杂交后的突变型基因DNA片段通过高温变性从固态物质上解离，迅速提取溶液再缓慢降低温度复性。
7.根据权利要求4所述的一种提高基因突变检测灵敏度的方法，其特征在于：所述固态物质为羧基磁珠或DNA芯片。
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