[发明专利]一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR引物、探针、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR引物、探针、试剂盒及方法，所述引物包括用于扩增BCL2L1基因的引物F1和引物R1、以及用于扩增对照基因GADPH的引物F2和引物R2；所述探针包括用于检测BCL2L1基因的探针Probe1和用于检测对照基因GADPH的探针Probe2；所述试剂盒包括上述所述的引物和上述所述的探针。本发明的试剂盒使用FAM和VIC双通道实时定量检测BCL2L1中mRNA含量，准确性好，灵敏度高。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR引物、探针、试剂盒及方法。

背景技术

脓毒症(sepsis)是威胁新生儿、尤其早产儿生命以及导致残疾等不良预后的主要原因。新生儿sepsis症状不典型、病情变化迅猛，治疗费用巨大并容易导致医疗纠纷。目前急需具有前瞻性、时效性、准确性的评价指标，指导新生儿sepsis的治疗、协助判断预后。我们研究发现线粒体凋亡Bcl-xL蛋白可以作为新生儿脓毒症早期诊断的分子标志物，本发明将荧光定量PCR技术方法，在mRNA水平检测Bcl-xL蛋白表达情况，为sepsis的早期诊断提供了准确、快速、高效、敏感的检测方法。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR引物，该引物特异性好，检测灵敏精确。

本发明的另一个目的在于提供一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR探针，该探针特异性好，检测灵敏精确。

本发明的还一个目的在于提供一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒使用FAM和VIC双通道实时定量检测BCL2L1中mRNA含量，准确性好，灵敏度高。

本发明的再一个目的在于提供一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR方法，该方法具有准确、灵敏、快速、信号无干扰，成本较低等优点。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR引物，所述引物包括用于扩增BCL2L1基因的引物F1和引物R1、以及用于扩增对照基因GADPH的引物F2和引物R2，所述4条引物的核苷酸序列分别为：

F1：5’-CTGACCATCCACTCTACCCT-3’

R1：5’-GGTTCTCCTGGTGGCAAT-3’

F2：5’-TGCCATCAATGACCCCTTC-3’

R2：5’-ACAAGCTTCCCGTTCTCAT-3’。

本发明的另一个目的通过下述技术方案实现：一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR探针，所述探针包括用于检测BCL2L1基因的探针Probe1和用于检测对照基因GADPH的探针Probe2，所述探针Probe1的核苷酸序列为：5’-CCCTTCTCTGCTCCACCACATCCTC-3’，所述探针Probe2的核苷酸序列为：5’-CCTTGACGGTGCCATGGAATTTGC-3’，所述探针Probe1和探针Probe2的5’端均标记荧光基团，3’端均标记淬灭基团。

优选的，所述探针Probe1的5’端标记荧光基团FAM，3’端标记淬灭基团BHQ1。

优选的，所述探针Probe2的5’端标记荧光基团VIC，3’端标记淬灭基团BHQ1。

本发明的还一个目的通过下述技术方案实现：一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR试剂盒，所述试剂盒包括上述所述的引物和上述所述的探针。

本发明的再一个目的通过下述技术方案实现：一种用于非治疗目的的检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：