[发明专利]一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR引物、探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR引物，其特征在于：所述引物包括用于扩增BCL2L1基因的引物F1和引物R1、以及用于扩增对照基因GADPH的引物F2和引物R2，所述4条引物的核苷酸序列分别为：

F1：5’-CTGACCATCCACTCTACCCT-3’

R1：5’-GGTTCTCCTGGTGGCAAT-3’

F2：5’-TGCCATCAATGACCCCTTC-3’

R2：5’-ACAAGCTTCCCGTTCTCAT-3’。

2.一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR探针，其特征在于：所述探针包括用于检测BCL2L1基因的探针Probe1和用于检测对照基因GADPH的探针Probe2，所述探针Probe1的核苷酸序列为：5’-CCCTTCTCTGCTCCACCACATCCTC-3’，所述探针Probe2的核苷酸序列为：5’-CCTTGACGGTGCCATGGAATTTGC-3’，所述探针Probe1和探针Probe2的5’端均标记荧光基团，3’端均标记淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR探针，其特征在于：所述探针Probe1的5’端标记荧光基团FAM，3’端标记淬灭基团BHQ1。

4.根据权利要求2所述的一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR探针，其特征在于：所述探针Probe2的5’端标记荧光基团VIC，3’端标记淬灭基团BHQ1。

5.一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的引物和权利要求2-4任一项所述的探针。

6.一种用于非治疗目的的检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)提取样本RNA：分别提取正常血液样本S1和患者血液样本S2的RNA，标记为S1-RNA和S2-RNA；

(2)反转录：将提取的正常血液样本S1和患者血液样本S2的RNA分别反转录成cDNA，标记为S1-cDNA和S2-cDNA；

(3)荧光定量PCR：使用FAM和VIC双通道实时荧光定量RT-PCR分别检测上述S1-cDNA和S2-cDNA，通过检测的Ct值定量计算出血清样品中BCL2L1中mRNA的含量。

7.根据权利要求6所述的一种检测BCL2L1中mRNA的荧光定量PCR方法，其特征在于：所述步骤(1)具体为：

(1.1)将正常血液样本S1和患者血液样本S2室温放置5-10min，使得核蛋白与核酸完全分离；

(1.2)分别加入0.15-0.25mL氯仿，剧烈振荡10-20s，室温放置2-4min；然后在3-5℃温度下以10000-1400rpm转速离心8-12min；

(1.3)分别吸取上层水相转移至干净的离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置15-25min；然后在3-5℃温度下以10000-1400rpm转速离心8-12min，弃上清；

(1.4)分别加入0.8-1.2mL质量分数为70％-80％的乙醇洗涤沉淀，然后在3-5℃温度下以10000-1400rpm转速离心2-4min，弃上清，室温干燥5-10min；

(1.5)分别加入30-50μL RNase-free ddH₂O，充分溶解RNA，将所得到的S1-RNA和S2-RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。