[发明专利]用于检验嗜碱性细胞活化的方法

说明书

诊断过敏反应的方法，其包括以下步骤：a)在全血的存在下，在水溶液中，使患者全血样品中的嗜碱性细胞与过敏原接触，其中全血与水溶液的体积比为至少20体积％，条件是使所述嗜碱性细胞允许被所述过敏原活化，b)富集获自步骤a)的嗜碱性细胞并c)检验活化的嗜碱性细胞，其中所述检验经此实现，即借助化学发光法检测活化嗜碱性细胞的表征性标志物的表达；本发明还涉及试剂盒，其包含用于使嗜碱性细胞与过敏原接触的容器(其中所述容器优选是微滴定板)、任选的过敏原、借助化学发光法检测活化嗜碱性细胞的表征性标志物的试剂(其中优选为针对标志物的配有能化学发光的标记的配体且所述配体更优选是单克隆抗体)、任选的用于终止所述嗜碱性细胞活化的试剂、任选结合到不依赖于嗜碱性细胞活化状态位于嗜碱性细胞表面的多肽上的可固定化的配体(其中所述配体优选是针对所述多肽的单克隆抗体)、和任选的用于胞溶和/或去除红细胞的试剂。

本发明涉及用于诊断过敏反应的方法，其包括以下步骤：a)在全血的存在下，在水溶液中，使患者全血样品中的嗜碱性细胞与过敏原接触，其中全血与水溶液的体积比为至少20体积％，条件是使所述嗜碱性细胞允许被所述过敏原活化，b)富集获自步骤a)的嗜碱性细胞并c)检验活化的嗜碱性细胞，其中所述检验经此实现，即借助化学发光法检测活化嗜碱性细胞的表征性标志物；本发明还涉及试剂盒，其包含用于使嗜碱性细胞与过敏原接触的容器(其中所述容器优选是微滴定板)、任选的过敏原、借助化学发光法检测活化嗜碱性细胞的表征性标志物的试剂(其中优选为针对标志物的配有能化学发光的标记的配体且所述配体更优选是单克隆抗体)、任选的用于终止所述嗜碱性细胞活化的试剂、任选结合到不依赖于嗜碱性细胞活化状态位于嗜碱性细胞表面的多肽上的可固定化的配体(其中所述配体优选是针对所述多肽的单克隆抗体)、和任选的用于胞溶和/或去除红细胞的试剂。

用于速发型过敏(也称为I型过敏，其基于IgE介导的免疫应答)的诊断，根据详细的既往史首先进行皮试如皮肤点刺测试或诱发测试，这对于过敏诊断学是金标准。作为补充,使用体外测试，用其检验针对一种或多种经定义的过敏原的特异性IgE-抗体的存在。

对于这种检验，将过敏原结合到如小海绵、膜或小球的基质上并与患者血清接触。随即借助经标记的抗-人-IgE抗体测定经结合的IgE的量。

体外特异性IgE-测定的优点包括其便利的可操作性、可标准化特性(Standardisierbarkeit)和可规模化性(Aufskalierbarkeit)。然而，通常不能区分临床相关的过敏和只是敏感。

其它缺点是某些过敏原的不良可支配性和由于过敏原偶合基质而使过敏原构型可能变化，这可改变过敏原对待检验的IgE-抗体的亲和性。在很多情况下，过敏原提取物仅艰难地被标准化或根本不能被标准化。较小的过敏原还必须结合到载体分子如血清白蛋白上。此外，对于血清中的IgE-抗体与在效应细胞如嗜碱性细胞和肥大细胞上的膜结合的IgE-抗体的过敏原特异性不必一致，因为溶解的和结合的IgE仅缓慢地发生交换。最后，不能在用于检验特异性IgE-抗体的体外测试中反映的额外因素，确定是否确实诱发了细胞性过敏反应，所述因素例如在血液中总IgE与特异性IgE的总量比或抗体的亲和性。

特别是当IgE测试和皮试提供不明确的结果时，就此值得推荐的是，作为补充，采用细胞测试系统如嗜碱性细胞-脱粒测试或嗜碱性细胞-活化测试(BAT)。通常，与流式细胞测量法-测试相关地使用术语“BAT”。

细胞测试相比于仅测定在血清中溶解的、未生物活化的IgE-部分的特异性IgE-抗体测定的特别优点是，其确实地反映细胞生物学反应，其通过过敏原在嗜碱性细胞的细胞表面上的受体结合的IgE-抗体上的结合及其横向交联(Quervernetzung)诱发。所述细胞测试还允许测定脱粒能力的阈值。对此特别需要用于治疗进程监控的免疫治疗。