[发明专利]一种用于电镜扫描的样品制备方法

说明书

本发明属于样品制备技术领域，公开了一种用于电镜扫描的样品制备方法，样品从戊二醛固定液中取出，用PBS缓冲液清洗三次，每次20min；1％锇酸固定1h，pH7.4 PBS清洗三次，每次15min；低浓度梯度乙醇脱水，30％乙醇，50％乙醇各15min；高浓度梯度乙醇脱水。本发明通过电子扫描显微镜(SEM)样品制备技术的探索和改进，不仅成功了制备了蚊虫各个发育时期的电镜样品，而且较全面的对中华按蚊各个发育时期的超细微结构进行电镜拍照和再描述，不仅为昆虫电镜样品制备提供了较为全面的技术，也为中华按蚊的分类学分析提供了更为详细的形态特征数据。

技术领域

本发明属于电镜材料技术领域，尤其涉及一种用于电镜扫描的样品制备方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

蚊虫的形态分类一般不仅仅借助于成虫的形态特征，还要观察各个发育时期的形态特征进行更为准确的鉴定和分类，才能对种类进行准确的鉴定。

扫描电子显微镜(scanning electron microscope，SEM)是超微形态学分析中的重要工具。SEM具有分辨率高、视野大、景深长和立体感强等优势，可对光学显微镜下分辨困难的结构进行深入解析。而由于蚊虫个体较小，光学显微镜下一些涉及到的微小的分类特征很难进行观察和鉴别，因此借助于电镜对蚊虫各个发育时期进行细微特征的拍照和特征鉴别也是目前常常采用的形态分类方法。1981年徐锦江等采用戊二醛固定，各级乙醇脱水置换于醋酸乙酯的方法制备电镜样品并对中华按蚊、雷氏按蚊嗜人亚种(A.lesterianthropophagus Xü et Feng)的成蚊体表的喙、触角、平衡棒、中胸盾片、腹部，蛹的呼吸管，卵的细微结构等进行了电镜拍照和观察描述^[13]。1989年柯昭喜等对幼虫样品进行各级酒精脱水，醋酸戊酯置换，液态二氧化碳干燥电镜拍照，并对14种库蚊和6种其他蚊属幼虫颅壳、呼吸管、尾节体表细微结构进行电镜拍照和观察描述^[14]。2010年李旦等采用戊二醛固定过夜，酒精-丙酮梯度脱水，醋酸异戊酯置换的方法制备电镜样品并对白纹伊蚊(Aedesalbopictus)、致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)、中华按蚊和五指库蚊(Cluexbarraudi)的幼虫栉齿、成蚊小盾板、蛹呼吸管和外壁纹饰和卵的超微结构进行了电镜拍照和观察描述^[15]。

而由于蚊虫的幼虫和蛹期电镜样品处理困难的缘故，在对中华按蚊整个发育时期进行详细的电镜扫描和观察描述的分析几乎没有。

本分析在他人分析的基础上，进一步找出了一种制备中华按蚊各个发育时期虫体的电镜样品制备方法，并对中华按蚊各个发育时期的形态特征进行了电镜扫描拍照和形态描述，为蚊虫及相关昆虫电镜样品的制备和中华按蚊的形态分类提供了参考的分析方法和数据基础

综上所述，现有技术存在的问题是：

现有技术的样品制备性能差；蚊虫的形态分类一般不仅仅借助于成虫的形态特征，还要观察各个发育时期的形态特征进行更为准确的鉴定和分类，才能对种类进行准确的鉴定；

现有技术中并没有对中华按蚊各个发育时期的形态特征进行电镜扫描拍照和形态描述，不能为蚊虫及相关昆虫电镜样品的制备和中华按蚊的形态分类提供了参考的分析方法和数据基础。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种扫描电镜材料及制备方法。

本发明是这样实现的，一种用于电镜扫描的样品制备方法，所述用于电镜扫描的样品制备方法包括：

样品从2.5％戊二醛固定液中取出，用pH7.4PBS缓冲液清洗三次，每次20min；

1％锇酸固定1h，pH7.4PBS清洗三次，每次15min；

低浓度梯度乙醇脱水，30％乙醇，50％乙醇各15min；