[发明专利]一种用于电镜扫描的样品制备方法

权利要求书

1.一种用于电镜扫描的样品制备方法，其特征在于，所述用于电镜扫描的样品制备方法包括：

样品从2.5％戊二醛固定液中取出，用pH7.4PBS缓冲液清洗三次，每次20min；

1％锇酸固定1h，pH7.4PBS清洗三次，每次15min；

低浓度梯度乙醇脱水，30％乙醇，50％乙醇各15min；

高浓度梯度乙醇脱水，60％、70％、80％、90％、100％乙醇各15min；

50％叔丁醇，75％、100％叔丁醇各10min；

叔丁醇：乙醇＝2:1，叔丁醇：乙腈＝1:1，乙腈各10min。

2.如权利要求1所述的用于电镜扫描的样品制备方法，其特征在于，所述的用于电镜扫描的样品制备方法还包括样品的离心；具体包括：

1)先将纯化后的样品离心12000r/8min，弃上清，加入2.5％戊二醛200ul，温室静置5h；

2)静置后12000r/8min，小心吹取上清去掉加入200ul PBS(7.4)，摇匀，摇床混匀20min，后12000r/10min弃上清，留沉淀；完全PBS清洗一次；

3)继续步骤2)操作，且重复两次，后两次加入500ul PBS清洗；

3)50％乙醇脱水后12000r/15min，弃上清，留沉淀。

3.如权利要求1所述的用于电镜扫描的样品制备方法，其特征在于，所述用于电镜扫描的样品制备方法还包括：

(1)风干后的卵粒直接均匀的平铺在导电胶带上后，吹风，卵粒粘连在胶带上后，用离子溅射仪镀膜1.5min后在5kv电压下进行拍照；

(2)取得中华按蚊羽化成成蚊之后留下的蛹皮，羽化三天的雌蚊和雄蚊至于-20℃冰柜冷冻3～5分钟；用双蒸水反复清洗，6％戊二醛固定1～3h，经0.1M磷酸缓冲液清洗8～9次；样品经漂洗后用逐级增高浓度的乙醇脱水50％乙醇10～15min、70％乙醇10～15min、80％乙醇10～15min、90％乙醇10～15min、95％乙醇10～15min、100％乙醇2次每次30min；之后叔丁醇与乙醇混合液置换至100％叔丁醇；移入叔丁醇低温冷冻干燥机的模子中，在样品表面滴上100％叔丁醇，将样品置于4℃以下使样品快速固化；后置于VFD-21S叔丁醇冷冻干燥剂使样品在真空中升华干燥；用特质的导电胶带将样品固定在金属样品台上，用MSP-2S型离子溅射镀膜仪进行镀膜；最后置于SU3500型扫描电子显微镜下拍照；

(3)取得三龄时期的中华按蚊幼虫，于小白瓷碗中，饲养一至二天得到四龄幼虫；双蒸水反复清洗，6％戊二醛固定1～3h，用0.1M磷酸缓冲液清洗8～9次，用1％锇酸固定1h，0.1M磷酸缓冲液清洗8～9次；样品经漂洗后用逐级增高浓度的乙醇脱水。

4.一种利用权利要求1所述用于电镜扫描的样品制备方法的用于电镜扫描的样品制备设备。