[发明专利]全人源化单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种全人源化单克隆抗体及其制备方法和应用，公开了可与乙肝病毒表面抗原特异性结合全人源化单克隆抗体，并且其能有效地抑制乙肝病毒感染肝细胞。还公开了本发明所述的全人源化单克隆抗体的编码基因以及全人源化单克隆抗体在预防或治疗乙型肝炎病毒感染的应用。

技术领域

本发明涉及生物医药和基因工程技术领域，具体涉及一种全人源化单克隆抗体及其制备方法和应用，尤其是涉及一种乙型肝炎病毒表面抗原特异性的全人源化单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

慢性乙型肝炎病毒感染是一种世界范围内普遍流行的病毒传染性疾病，全球约有2.4亿的慢性乙肝病毒携带者。尽管由于成功的疫苗接种，我国一般人群的表面抗原的携带率有了较为明显的下降。据推算，我国目前仍有约9300万慢性乙肝病毒感染者，其中慢性乙型肝炎患者约2000万。因此，在相当长的时间内，如何预防和治疗慢性乙型肝炎仍是我们面临的严峻挑战。

慢性乙型肝炎病毒感染是导致肝硬化及肝癌的最主要的原因之一。HBV感染者发展为严重肝脏疾病如肝功能不全、肝硬化、肝癌的风险较高。慢性HBV感染现有治疗方法仍有不足，如干扰素免疫调节治疗策略仅能使一小部分的患者获得临床治愈；核苷(酸)类似物治疗能抑制病毒复制，但是停药后很难达到持续病毒学应答且临床治愈率极低。

建立在人单克隆抗体基础上的免疫疗法至今取得了令人瞩目的成功，特别是在治疗某些肿瘤和自身免疫疾病及感染性疾病方面。更多的近期研究显示慢性病毒感染疾病可以通过单抗相关的免疫疗法治疗，中和抗体能通过抗原结合部位识别病毒，特异性阻断病毒入侵。除此之外，中和抗体还有免疫“效应”功能，包括清除循环的病毒，介导细胞毒作用或介导吞噬受感染细胞，甚至可能使机体获得持续的免疫反应。所以虽然慢性乙肝病毒的免疫治疗进展不尽如人意，但是基于中和抗体的免疫疗法可能是治愈慢性乙肝感染的新的方法。

表面抗体是针对乙型肝炎病毒表面抗原的中和性抗体，中和表面抗原并清除循环的乙肝病毒，健康者接种乙型肝炎疫苗后或患者在乙肝病毒感染的自然进程以及治疗过程中，若出现表面抗体则一般认为机体已获得保护或已经清除表面抗原。大量研究表明表面抗体能使健康人群获得长期保护。表面抗体的保护作用体现在主动免疫和被动免疫两方面。一方面，健康者特别是新生儿通过接种乙型肝炎疫苗的主动免疫方式，诱导产生表面抗体，能为机体提供体液免疫保护。另一方面，被动免疫通过注射乙肝免疫球蛋白清除乙型肝炎病毒。另外，注射乙肝免疫球蛋白是“乙肝疫苗无应答者”在乙肝病毒暴露后的首选保护方式。对于慢性乙肝感染患者，表面抗原血清学转换被认为是疾病痊愈的标志。综上所述，表面抗体能清除循环的表面抗原和抑制乙肝病毒复制，具有强大的保护作用。目前市场中的乙肝免疫球蛋白是从血清学检测表面抗体高水平者血浆中制备的多克隆的表面抗体，并不是一个理想的抗体来源，受限于供体，特异性低，不良反应，并且可能有致病原污染。单克隆抗体半衰期长，毒性低，亲和力高，特异性高等优点，因此可能成为乙肝免疫球蛋白的替代品。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种全人源化单克隆抗体及其制备方法和应用，尤其是涉及一种乙型肝炎病毒表面抗原特异性的全人源化单克隆抗体，结合单克隆抗体半衰期长、毒性低、亲和力高、特异性高等优点，实现优异的HBV中和能力。

为实现上述目的，本发明提供如下方案：

一方面，本发明提供一种全人源化单克隆抗体，其包括重链可变区(V_H)和轻链可变区(V_L)；

所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:5所示；

所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7所示。

优选地，所述全人源化单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。