[发明专利]一种检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

本发明涉及一种检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法，属于免疫分析技术领域。本发明提供的一种检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒，采用双抗体夹心法，利用吖啶酯瞬时发光及磁珠分离技术，并利用生物素‑亲和素体系级联放大效应，与其他厂家的链霉亲和素磁珠‑生物素‑胰岛素抗体相比本发明将步骤1)制得的包被有链霉亲和素的磁珠与步骤2)制得的标记有生物素的胰岛素抗体第一抗体结合反应，得磁珠‑SA‑生物素‑胰岛素抗溶剂，大大提高了检测试剂的灵敏度，减少反应时间，降低噪音。本发明提供的试剂盒的制备方法，具有工艺简单、制得的磁珠的分散态良好，磁珠不易凝集，所用试剂重复性好等优点。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

胰岛素(Insulin,Ins)是由胰腺内胰岛β细胞合成、储存和分泌的蛋白质激素，是体内唯一能够降低血糖的激素。人胰岛素是由51个氨基酸组成的多肽，分子量约为5808Da，含A链(21个氨基酸)和B链(30个氨基酸)，肽链间以两条二硫键相连。最初，胰岛素作为一个大分子—前胰岛素原(110个氨基酸)储存于胰岛β细胞中。前胰岛素原裂解出一个含有24个氨基酸的肽，形成胰岛素原。胰岛素原经蛋白酶和羧肽酶的作用切下中间部分C链(C肽)，将胰岛素原的羧基端部分(A链)和氨基端部分(B链)通过二硫键结合在一起形成胰岛素。胰岛素在血清或者血浆中的半衰期是5至10分钟。

成熟的胰岛素储存在胰岛β细胞内的分泌囊泡中，与锌离子配位形成六聚体。在内源性或者外源性物质如葡萄糖、乳糖和核糖等刺激下随分泌囊泡释放至血液中，并发挥其生理作用。循环中的胰岛素大约50％被肝脏清除。胰岛素的生物作用是通过与靶细胞膜上的受体结合而发挥作用，靶组织主要是肝脏、脂肪和肌肉组织。胰岛素主要通过刺激肝糖原的合成、脂肪组织中甘油三酯的合成以及肌肉中蛋白质的合成来降低血液中葡萄糖的浓度。

胰岛素代谢紊乱会引发糖尿病。胰岛素检测包括空腹和餐后，可以用于判定糖尿病的类型(Ⅰ型或者Ⅱ型)。临床上，糖尿病分为两种类型:Ⅰ型(胰岛素依赖型，IDDM)和Ⅱ型(胰岛素非依赖型，NIDDM)。Ⅰ型糖尿病是由于胰岛β细胞被自身免疫损坏或者存在胰岛素自身抗体导致胰岛素绝对缺乏引起，Ⅱ型糖尿病是由于肥胖、高热量饮食、体力活动不足等导致患者的胰岛素分泌能力及身体对胰岛素的敏感性下降，导致血糖升高。

目前用于检测胰岛素的免疫分析方法主要有酶联免疫分析法和化学发光免疫分析法。酶联免疫分析法采用碱性磷酸酶标记抗体，用于催化发光底物产生颜色变化，具有操作简单，试剂稳定性长等特点，但试剂的检测灵敏度较低。化学发光免疫分析法采用催化剂催化化学发光物质形成一种激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时，发出光子，具有操作简单，自动化程度高，检测速度快等优点。

目前市售的胰岛素检测试剂盒主要分为以下2种：一是ELISA方法即辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶标记一株胰岛素抗体，固相载体(微孔板或固相微粒)包被另一株胰岛素抗体，利用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶催化发光底物产生颜色变化，检测血清或血浆中胰岛素的浓度；二是三联吡啶钌电化学发光法，采用链霉亲和素磁珠，一株胰岛素抗体标记生物素，另一株胰岛素抗体标记三联吡啶钌，经过免疫反应形成磁珠-链霉亲和素-生物素-胰岛素抗体-胰岛素-胰岛素抗体-三联吡啶钌复合物，在电场加压条件下发光。

以上定量检测胰岛素的方法存在以下缺陷：1)ELISA方法采用微孔板作为固定性，包被密度有限，灵敏度较低，反应时间较长；2)采用三联吡啶钌的电化学发光法，仪器要求较高，试剂及仪器昂贵。

发明内容

本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法。本发明提供的检测试剂盒用于检测血清/血浆中胰岛素，具有灵敏度高，特异性好，操作简单等优点。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：