[发明专利]一种检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法

权利要求书

1.一种检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括：

1)用20mM PB缓冲液稀释的链霉亲和素包被的磁微粒溶液；

2)生物素标记的胰岛素抗体；

3)吖啶酯标记的胰岛素抗体；

4)校准品；

5)质控品；

所述校准品和质控品分别各含高、低两个浓度点。

2.根据权利要求1所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素包被的磁微粒溶液中磁微粒与链霉亲和素质量比1：10-1：20。

3.根据权利要求1所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素包被的磁微粒溶液中磁微粒与链霉亲和素质量比1：15。

4.根据权利要求1所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的胰岛素抗体中胰岛素抗体与生物素的摩尔比1：5-1：20。

5.根据权利要求1所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的胰岛素抗体中胰岛素抗体与生物素的摩尔比1：10。

6.根据权利要求1所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯标记的胰岛素抗体中胰岛素抗体与吖啶酯的摩尔比1：5-1：20。

7.根据权利要求1所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯标记的胰岛素抗体中胰岛素抗体与吖啶酯的摩尔比1：10。

8.一种权利要求1-7任意一项所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)链霉亲和素包被的磁微粒溶液

取磁微粒，用PB缓冲液清洗，然后稀释，添加链霉亲和素，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用PB缓冲液清洗，加入封闭液，所述封闭液为含2-5％BSA的20mMPB缓冲液，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用PB缓冲液清洗，最后用20mM PB缓冲液稀释后保存备用，得到链霉亲和素包被的磁微粒溶液；

2)生物素标记的胰岛素抗体

取胰岛素抗体，用PB缓冲液置换胰岛素抗体保存液，然后用PB缓冲液稀释，添加生物素，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，所述封闭液为含2-5％BSA的20mM PB缓冲液，37℃孵育2-4h，然后蛋白纯化仪纯化，收集蛋白峰值，得到生物素标记的胰岛素抗体；

3)吖啶酯标记的胰岛素抗体

取胰岛素抗体，用PB缓冲液置换胰岛素抗体保存液，然后用PB缓冲液稀释，添加吖啶酯，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，所述封闭液为含2-5％BSA的20mM PB缓冲液，37℃孵育2-4h，然后蛋白纯化仪纯化，收集蛋白峰值，得到吖啶酯标记的胰岛素抗体；

4)分装校准品、质控品、链霉亲和素包被的磁微粒溶液、生物素标记的胰岛素抗体和吖啶酯标记的胰岛素抗体，再组装成成品。

9.一种权利要求1-7任意一项所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于，采用一步法两步孵育，具体步骤如下：

1)样本中胰岛素抗原与生物素标记的胰岛素抗体、吖啶酯标记的胰岛素抗体发生免疫反应，形成生物素-胰岛素抗体-胰岛素-胰岛素抗体-吖啶酯溶剂；

2)向步骤1)的溶剂中加入链霉亲和素包被的磁微粒溶液，形成磁珠-链霉亲和素-生物素-胰岛素抗体-胰岛素-胰岛素抗体-吖啶酯复合物；

3)加入清洗缓冲液，将未反应的溶液清洗去除；

4)加入酸性激发液，使吖啶酯标记物游离；加入碱性激发液，使吖啶酯发射光子；光电倍增管接收光量子数与胰岛素的量成正比。

10.根据权利要求9所述的检测血清/血浆中胰岛素的化学发光定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述酸性激发液为过氧化氢和硝酸的混合溶液，所述碱性激发液为氢氧化钠溶液。