[发明专利]利用双三元检测骨化三醇软胶囊有关物质的方法

说明书

本发明涉及药品技术领域，尤其涉及一种检测骨化三醇软胶囊有关物质的测定方法。本发明的发明名称为利用双三元高效液相色谱法检测骨化三醇软胶囊有关物质的方法，使用高效液相色谱分析仪进行测定，分别测定供试品与对照的峰面积，自身对照法计算样品的有关物质含量。提高了样品测定的灵敏度，能检测到0.01%的杂质，对已知杂质和未知杂质均能有效的控制，准确度有明显的提高，操作简单、灵敏、耐用性好，为药品的检测提供了可靠的有关物质数据，对药品的质量有更好的控制。

技术领域

本发明涉及药品技术领域，尤其涉及一种检测骨化三醇软胶囊有关物质的测定方法。

背景技术

骨化三醇在调节钙平衡方面的关键作用，包括对骨骼中成骨细胞活性的刺激作用，为治疗骨质疏松症提供充分的药理基础。适应于绝经后骨质疏松；慢性肾功能低下；术后甲状腺功能低下；特发性甲状旁腺功能低下；假性甲状腺功能低下；维生素D依赖性佝偻病；低血磷性维生素D抵抗型佝偻病等。

骨化三醇软胶囊的规格为0.5ug和0.25ug。目前国内外文献测定有关物质方法，有高效液相法和LC-MS-MS法，其中高效液相法的灵敏度太低，最低只能检测约1%左右的杂质，不能有效的检测出有关物质的含量；LC-MSMS法只能测定已知杂质的含量，且需要的杂质对照品也不易获得，对未知杂质不能有效的测定。目前没有一种简单、高效、准确的测定骨化三醇软胶囊有关物质的方法。

发明内容

针对上述技术问题，本发明目的是提供利用双三元高效液相色谱法检测骨化三醇软胶囊有关物质的方法，该方法灵敏度高、操作简单、高效、准确。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的:

本发明的利用双三元高效液相色谱法检测骨化三醇软胶囊有关物质的方法，包括如下步骤：

（a）供试品的制备：取骨化三醇软胶囊适量，加稀释剂稀释后作为供试品溶液；

（b）对照溶液的制备：供试品溶液适量，加稀释剂稀释后作为对照溶液；

（c）利用双三元高效液相色谱法，进行二维色谱柱分离，通过多波长紫外检测器或二极管阵列检测器测定，用自身对照法计算待测溶液中骨化三醇的有关物质。采用C18 二维色谱柱测定；第一维色谱柱为富集柱C18 柱，内径为4.6mm，柱长为100mm，填料粒径为5μm，第二维色谱柱为分析柱C18 柱，内径为4.6mm，柱长为250mm，填料粒径为5μm ；高效液相色谱分析仪包括：双三元泵、在线过滤器、富集柱和分析柱；供试品溶液和供试品溶液分别通过双三元泵依次进入在线过滤器、富集柱和分析柱。本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：步骤（a）中所用的稀释剂1由甲醇、乙醇、正己烷、正丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、正丙醇等中的一种或者多种混合溶剂，作为稀释剂，也可以不稀释作为供试品溶液。本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：步骤（b）中对照溶液由供试品溶液稀释倍数为50-1000倍，优选100倍。本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：步骤（c）中流动相为甲醇、乙醇、正己烷、正丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、正丙醇中一种或者多种混合溶剂。可以进一步优化为乙酸乙酯-异丙醇-乙酸乙酯-正己烷（20:40:15：25）。

本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：流动相进行梯度洗脱，洗脱程序如下：

本发明的一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：六通阀切换时间如下：