[发明专利]利用双三元检测骨化三醇软胶囊有关物质的方法

权利要求书

1.一种利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：它包括以下步骤：

（a）供试品的制备：取骨化三醇软胶囊适量，加稀释剂稀释后作为供试品溶液；

（b）对照溶液的制备：供试品溶液适量，加稀释剂稀释后作为对照溶液；

（c）利用双三元高效液相色谱法，进行二维色谱柱分离，通过多波长紫外检测器或二极

管阵列检测器测定，用自身对照法计算待测溶液中骨化三醇的有关物质；

采用C18 二维色谱柱测定；

第一维色谱柱为富集柱C18 柱，内径为4.6mm，柱长为100mm，填料粒径为5μm，第二维

色谱柱为分析柱C18 柱，内径为4.6mm，柱长为250mm，填料粒径为5μm ；

高效液相色谱分析仪包括：双三元泵、在线过滤器、富集柱和分析柱；供试品溶液和供试品溶液分别通过双三元泵依次进入在线过滤器、富集柱和分析柱。

2.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：步骤（a）中所用的稀释剂1由甲醇、乙醇、正己烷、正丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、正丙醇等中的一种或者多种混合溶剂，作为稀释剂。

3.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：步骤（b）中对照溶液由供试品溶液稀释倍数为50-1000倍，优选100倍。

4.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：步骤（c）中流动相为甲醇、乙醇、正己烷、正丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、正丙醇中一种或者多种混合溶剂。

5.如权利要求4所述的流动相可以进一步优化为乙酸乙酯-异丙醇-乙酸乙酯-正己烷（20:40:15：25）。

6.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于，流动相进行梯度洗脱，洗脱程序如下：

。

7.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：六通阀切换时间如下：

时间（min）	阀
0	6-1
8	1-2
11	6-1

。

8.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：所述的柱温为25-45℃，优选35℃。

9. 如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：所述的检测波长为254nm- 270nm，优选265nm。

10.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测骨化三醇软胶囊药物有关物质的方法，其特征在于：所述的进样体积为0.2ml-20ml ，优选5ml。