[发明专利]一种口蹄疫多型表位肽、疫苗及其应用

说明书

本发明公开了一种口蹄疫多型表位肽、疫苗及其应用，涉及生物技术领域。本发明的口蹄疫多型表位肽是以瑞士乳杆菌S层蛋白(T‑8)基因为模板，设计引物，将O、A及Asia I3型FMDV的VP1特定表位基因嵌入到所述S层蛋白自我组装区域，再连接表达载体pGEX‑4T‑3，并转化到大肠杆菌BL21中进行表达，表达产物用SDS‑PAGE鉴定，获得口蹄疫多型表位肽。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种口蹄疫多型表位肽、疫苗及其应用。

背景技术

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病，主要感染牛、猪和羊等多种家畜和野生哺乳动物，对畜牧产业和国民经济造成严重的损失。FMD已成世界性分布、虽然化学方法灭活的全病毒肽在FMD的预防和控制过程中发挥着中药的作用，但是，在肽应用实践中凸显出很多不足。如纯化病毒颗粒难度大，病毒株储存条件苛刻，肽接种免疫效果不稳定等。FMDV在血清学上分7个血清型，即A/O/C/SAT/SAT2/SAT3和Asia I，每一型又多个亚型。在我国目前同时存在A型、O型和Asia I型。

目前口蹄疫基因工程亚单位肽又称生物合成亚单位肽或重组单位肽，是指将保护性抗原基因在原核或真核细胞中表达，并以基因产物-蛋白质或多肽制成肽。目前口蹄疫基因工程亚单位肽大多都是单价苗。由于各血清型之间的抗原性不同，此间又无交叉免疫现象，此单价苗的预防效果比较有限。虽然以FMDV-A/C为代表大的基因工程多价苗已经诞生，在膝鼠和牛体实验中获得了喜人的结果，其对插入基因表达产物的免疫原性不高，有部分动物可以抵抗强毒攻击，对动物免疫效果比传统肽低。

如何研制出高效、安全、抗原表达量高的嵌合多价亚单位肽仍然是科研工作者面临的主要问题。

发明内容

有鉴于此，本发明实施例提供了一种口蹄疫多型表位肽、疫苗及其应用。

为达到上述目的，本发明主要提供了如下技术方案：

一方面，本发明实施例提供了一种口蹄疫多型表位肽，所述肽是以瑞士乳杆菌S层蛋白(T-8)基因(其氨基酸序列为SEQ ID NO.9)为模板，设计引物，将O、A及Asia I3型FMDV的VP1特定表位基因嵌入到所述S层蛋白自我组装区域，再连接表达载体pGEX-4T-3，并转化到大肠杆菌BL21中进行表达，表达产物用SDS-PAGE鉴定，获得口蹄疫多型表位肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO.10，核苷酸序列NO.11。

作为优选，所述构建方法中设计的引物：

引物对1的上游引物核苷酸序列为SEQ ID NO.1，下游引物核苷酸序列为SEQ IDNO.2；

引物对2的上游引物核苷酸序列为SEQ ID NO.3，下游引物核苷酸序列为SEQ IDNO.4；

引物对3的上游引物核苷酸序列为SEQ ID NO.5，下游引物核苷酸序列为SEQ IDNO.6；

引物对4的上游引物核苷酸序列为SEQ ID NO.7，下游引物核苷酸序列为SEQ IDNO.8。

作为优选，所述口蹄疫多型表位肽的构建方法具体包括以下步骤：

(1)以所述S层蛋白(T-8)核酸为模板，通过所述引物对1进行PCR扩增得到扩增产物1；利用引物对2进行PCR扩增得到扩增产物2；将所述扩增产物1和所述扩增产物2的混合物作为模板，利用所述引物对1的上游引物和所述引物对2的下游引物作为新引物对进行PCR扩增得到扩增产物3；