[发明专利]一种高白细胞性白血病PDX模型的建立方法

说明书

本发明属于动物模型技术领域，具体涉及一种高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，具体包括：筛选合适的高白细胞性白血病临床患者；采用COM.TEC血细胞分离机分离外周血中白细胞；分离纯化所采集的外周血中白细胞的单个核细胞并进行细胞培养，得到白血病细胞悬液；制备高白细胞性白血病PDX模型：首先将小鼠用χ‑ray放射线辐照，然后将白血病细胞悬液注射至小鼠尾静脉，一周后通过随机抽取小鼠尾巴血液进行检测，根据检测结果判断模型是否建立成功。本发明所述高白细胞性白血病PDX模型的建模成功率高，所构建的小鼠PDX模型的疾病表现和细胞形态可以直接反映出高白细胞性白血病细胞的特点。

技术领域

本发明属于动物模型技术领域，具体涉及一种高白细胞性白血病PDX模型的建立方法。

背景技术

白血病为血液系统最常见的恶性肿瘤，是一类造血干细胞异常的克隆增殖性疾病，预后差。高白细胞性白血病(Hyperleukocytic Leukemia，HLL)是指外周血白细胞异常增多(≥100×10⁹/L)的高危类型白血病。白细胞异常增高产生白细胞淤滞和血管壁浸润，特别容易发生呼吸窘迫综合征和颅内出血，而化疗缓解率低，又容易出现肿瘤溶解综合征。然而，目前对于高白细胞性白血病的相关研究仍然处于起步阶段，我们在临床工作中发现，某些具有高白细胞性白血病的患者病情恶性程度高，易复发，放化疗效果差，这些宝贵的临床病例能够为白血病的科学研究提供极好的基础。小鼠是研究白血病的理想动物模型，近年来，有报道将人白血病细胞移植入小鼠体内构建PDX小鼠模型，但由于细胞数目少、细胞纯度低等缺点，成模率非常低。此外，如果长期培养扩增白血病细胞，容易导致细胞基因及免疫表型变异。因此，目前国内外尚无建立高白细胞性白血病PDX模型的报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种高白细胞性白血病PDX模型的建立方法。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，包括如下步骤：

(1)选择合适的高白细胞性白血病临床患者；

(2)采用COM.TEC血细胞分离机分离采集步骤(1)所述高白细胞性白血病临床患者的外周血中白细胞；

(3)分离所采集的外周血中白细胞的单个核细胞，进一步磁珠分选纯化单个核细胞，进行细胞培养，获得白血病细胞悬液；

(4)制备高白细胞性白血病PDX模型：首先将小鼠用χ--ray放射线辐照，然后将步骤(3)培养所得白血病细胞悬液注射至小鼠尾静脉，一周后通过随机抽取小鼠尾巴血液进行检测，根据检查结果判断模型是否建立成功。

上述方案中，步骤(1)所述高白细胞性白血病临床患者的标准为：a)年龄18-60岁，白血病患者；b)ECOG行为状态评分为0-2分；c)肝肾功能基本正常；d)外周血中白细胞WBC≥100×10⁹cells/ml。

上述方案中，步骤(2)所述血细胞分离机分离采集的主要参数设置为：

a)白细胞总数(WBC)：设至最大值为120×10E3/UL；

b)每循环血量(V(Cycle))：第一个循环设为180ml；第二个循环开始：先根据白细胞总数按照下列经验值设定WBC30万，80-100ml；然后在白膜收集阶段时观察白膜，若此时分离腔内有剩余白膜，则下调“V”，每次下调10ml，直至观察不到白膜；反之则上调“V”，每次上调10ml，但不超过上限180ml；

c)白膜泵出量(V(Sopillover))：25ml；

d)白膜收集量(V(Buffy Coat))：先设到10ml，如果收集尾部变淡则减1-2ml，或者按“stop phase”手动控制收集截至点；