[发明专利]一种高白细胞性白血病PDX模型的建立方法

权利要求书

1.一种高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)筛选合适的高白细胞性白血病临床患者，所述高白细胞性白血病临床患者的筛选标准为：a)年龄18-60岁，白血病患者；b)ECOG行为状态评分为0-2分；c)肝肾功能基本正常；d)外周血中白细胞WBC≥100×10⁹cells/ml；

(2)采用COM.TEC血细胞分离机分离采集步骤(1)所述高白细胞性白血病临床患者的外周血中白细胞；

(3)分离所采集的外周血中白细胞的单个核细胞，并将磁珠分选后的CD34+的单个核细胞进行细胞培养，得到白血病细胞悬液；

(4)制备高白细胞性白血病PDX模型：首先将小鼠用χ-ray放射线辐照，然后将步骤(3)培养所得白血病细胞悬液注射至小鼠尾静脉，一周后通过随机抽取小鼠尾巴血液进行检测，根据检测结果判断模型是否建立成功。

2.根据权利要求1所述的高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，其特征在于，步骤(2)所述血细胞分离机分离采集外周血中白细胞的主要参数设置为：

a)白细胞总数设至最大值为120×10E3/UL；

b)每循环血量：第一个循环设为180ml；第二个循环开始，先根据白细胞总数按照下列经验值设定：白细胞总数30万，80-100ml，然后在白膜收集阶段时观察白膜，若此时分离腔内有剩余白膜，则下调“V”，每次下调10ml，直至观察不到白膜；反之则上调“V”，每次上调10ml，但不超过上限180ml；

c)白膜泵出量：25ml；

d)白膜收集量：先设到10ml，如果收集尾部变淡则减1-2ml，或者按“stop phase”手动控制收集截至点；

e)循环次数：至少使处理全血量达到2倍TBV；

f)全血流速：Hct30％时，50-60ml/min，不超过70ml/min；20％Hct30％时，不要超过40ml/min；Hct20％时，不要超过30ml/min；

g)抗凝剂与血液的体积比为1：9；

h)离心机转速：默认值为1500，在机器默认值基础上增加200；如果需要减少血小板损失，则使用默认值即可。

3.根据权利要求1所述的高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，其特征在于，步骤(3)所述分离单个核细胞的方法为：将步骤(2)所得白细胞血样加入到分离液的液面上，离心分离后，血样由上至下分为四层：第一层为血浆层、第二层为环状乳白色单个核细胞层、第三层为透明分离液层、第四层为红细胞层，吸取第二层环状乳白色单个核细胞层，清洗液进行清洗后，进行磁珠分选得到CD34+的单个核细胞。

4.根据权利要求3所述的高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，其特征在于，所述分离液为人全血单个核细胞分离液。

5.根据权利要求1所述的高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，其特征在于，步骤(3)中所述培养单个核细胞的培养基为：含10wt％胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的1640培养基。

6.根据权利要求1所述的高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，其特征在于，步骤(3)中所述培养单个核细胞的培养条件为：将单个核细胞接种至培养基上，置于37℃、5％CO₂的培养箱中培养24～48h。

7.根据权利要求1所述的高白细胞性白血病PDX模型的建立方法，其特征在于，步骤(4)中所述小鼠为4～5周龄的B-NSG雌鼠；所述χ-ray放射线辐照的剂量为1.5～3.5Gy，辐照后6～12h内注射白血病细胞悬液至小鼠尾静脉；所述注射至小鼠尾静脉的白血病细胞悬液中含有1×10⁷～2×10⁷个Human白血病细胞。