[发明专利]一种用于治疗I型糖尿病的细胞组合制剂的制备方法及应用

说明书

一种用于治疗I型糖尿病的细胞组合制剂的制备方法及应用，属于再生医学与糖尿病学领域，包括以下步骤：A、获取人羊膜上皮细胞(hAECs)组织；B、恒温体外培养；C、诱导分化及收集细胞；D、传代培养；E、调配透明质酸溶液；F、将hAECs细胞加入到透明质酸溶液中并调整；G、静脉注射移植。通过动物实验可以明确得出，联合用药的模型组，可以极大程度的改善小鼠体内的血糖水平、胰岛素水平，移植8周后，小鼠体内的血糖水平、胰岛素水平、腹腔糖耐量的数值极为接近正常组数值；血浆中炎性因子水平均明显下调，综上，基于hAECs和透明质酸的良好生物学特性，本发明首次建立了hAECs联合透明质酸移植治疗I型糖尿病的方法，并取得显著疗效。

技术领域

本发明属于再生医学与糖尿病学领域，涉及到人羊膜上皮细胞与透明质酸组合细胞制剂移植治疗I型糖尿病的细胞组合制剂的制备方法及应用及应用。

背景技术

糖尿病是世界范围内最常见的代谢性疾病之一，近二十年来，患病率呈高发态势。国际糖尿病联合会（international Diabetes Federation, IDF）在2018年发布的全球糖尿病概览中提到：目前全球有4.25亿糖尿病患者，预计到2045年，患病人数将增至近7亿（Diabetes Res Clin Pract. 2018, 138:271-281.）。糖尿病主要包括I型糖尿病（type Idiabetes mellitus, T1DM）和II型糖尿病（type II diabetes mellitus, T2DM）。T1DM常见于青少年和儿童，其主要由自身免疫介导的胰岛β细胞进行性死亡，导致胰岛素分泌绝对缺乏，而引起血糖升高的一类代谢性疾病。

目前，T1DM主要通过注射胰岛素来控制血糖，但是受饮食、身体活动和代谢模式等诸多因素的影响，胰岛素注射不能稳定体内胰岛素水平的动态平衡，因而不能理想的控制体内血糖水平。随着器官移植技术的发展，人们试图通过胰腺或胰岛细胞移植，为糖尿病患者提供新的胰岛素分泌细胞（insulin producing cells, IPCs），达到控制血糖，乃至治愈糖尿病。但是，供体的稀缺、异种移植的免疫排斥反应和受体长期服用免疫抑制药物等诸多不利因素，限制了其临床应用（Cell Transplant, 2013, 22( 8): 1309-23.）。令人欣喜的是，近年来，干细胞移植治疗心血管疾病、骨损伤、神经系统及恶性肿瘤等疾病的研究取得了明显进展（Circ Res, 2011, 108(7): 792-6. 遵义医学院学报 2015, 38(5):439-49.Arthroscopy, 2013, 29(12): 2001-2011.），这为糖尿病的治疗提供了新思路。

近来，胎盘组织作为再生医学干细胞来源引起了广泛关注（Exp Mol Med, 2018,50(1): e425.），从该组织分离的许多类型细胞具有良好的可塑性。来自足月胎盘的人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cells, hAECs）（Stem Cells, 2005, 23(10):1549-59.）具有典型的胚胎干细胞的干性特征，现有技术表明，体外试验hAECs经过诱导分化后可以得到IPCs，且采用hAECs进行移植治疗无伦理问题、无配型成功率的障碍问题，取材方便，免疫原性低，移植入体内后无致瘤风险，是用于临床的理想种子细胞资源。