[发明专利]一种IL-6基因的快速扩增检测方法

说明书

本发明公开了一种IL‑6基因的快速扩增检测方法，所述扩增方法在同一扩增体系中同时扩增IL‑6基因的174位点和597位点，174位点作为扩增模板的序列如序列表SEQ ID NO:1所示，597位点作为扩增模板的序列如序列表SEQ ID NO:2所示。本发明采用多重PCR的扩增方法，同时扩增IL‑6的多个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T_m值设计合理，扩增产物便于检测分离。一次扩增多条目的产物，不仅大大提高了扩增效率，降低了扩增成本。这种检测试剂盒可以扩展延伸到其他的SNP位点检测中，具有良好的推广价值。

技术领域

本发明涉及一种IL-6基因的快速扩增检测方法，属于生物领域，尤其是生物检测领域。

背景技术

白细胞介素-6(IL-6)主要由巨噬细胞、T细胞、B细胞等多种细胞产生。它可调节多种细胞的生长与分化，具有调节免疫应答、急性期反应及造血功能，并在机体的抗感染免疫反应中起重要作用。IL-6在多种疾病时有明显改变。IL-6表达失调可引起许多疾病，其临床表现主要为发病时IL-6水平增高。IL-6上升的水平与疾病的活动期、肿瘤的发展变化、排斥反应程度以及治疗效果都密切相关，因此，对病人体液中IL-6水平的检测可反映患者的病情变化。

IL-6的基因具有DNA重复序列的多态性和单核苷酸多态性(SNP)两种形式，研究已证实IL-6基因5’端非编码区和3’端均存在多态性，IL-6的单核苷酸多态性的与高血压、冠心病、糖尿病等多种疾病相关。现有的IL-6检测均是单独SNP位点的检测，无法同时对IL-6的多个SNP位点进行同时扩增检测。因此，设计开发一种IL-6基因的快速扩增检测方法具有很重要的临床使用价值。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种IL-6基因的快速扩增检测方法。

为实现上述发明目的，本发明采用的IL-6基因的快速扩增检测方法的技术方案如下：

本发明中的扩增方法在同一扩增体系中同时扩增IL-6的两个基因位点，具体为174和597位点，174位点作为扩增模板的序列选自序列表SEQ ID NO:1所示的序列中，597位点作为扩增模板的序列选自序列表SEQ ID NO:2所示的序列中。

本扩增方法主要针对两个对IL-6的含量有较为重要影响的单核苷酸多态性(SNP)位点进行扩增，且该扩增可以在同一体系中进行，扩增时间、扩增体系及仪器等消耗均减少一半左右，不仅节约了资源，且一次性得到了两个扩增片段，对于后续的测序和实验具有更广泛的用途。

174位点的G/C替换、597位点的A/G替换已被证实是多种疾病的决定因素，替换会影响多个限制性内切酶的识别，因此同时对这两个位点进行扩增后检测，对于疾病的发病种类、发病率的风险预测、发病后的诊断和治疗均有准确地指导意义。

本发明中的扩增方法针对性地对上述两个位点设计了特异性引物，该特异性引物可以在多个模板DNA共存状态下准确识别并特异性地扩增对应的目标片段，扩增特异性高，非特异性条带少，扩增片段可简单分离后进行后续检测。经申请人多次重复试验后，优选的同时采用两组特异性引物的扩增效果最好，扩增174位点的上游引物序列如序列表SEQ IDNO:3所示，下游引物序列如序列表SEQ ID NO:4所示，扩增597位点的上游引物序列如序列表SEQ ID NO:5所示，下游引物序列如序列表SEQ IDNO:6所示。

本发明中的方法由于涉及多个片段的同时扩增，建议尽量减少干扰因素对扩增体系的影响，因此，优选采用提取后的人全血DNA作为扩增模板进行扩增，如需采用人全血DNA不经提取直接作为模板进行扩增，需要将普通缓冲液替换为全血扩增缓冲液。

优选的，全血扩增缓冲液含有100mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，pH 9.3～9.5。