[发明专利]一种测定抗VEGF抗体活性的方法及其应用

权利要求书

1.一种测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

提供转染了VEGF受体、IL-1R3、IL-1R6以及报告基因的效应细胞；

用anti-CD3抗体和anti-CD28抗体激活所述效应细胞；

向激活后的所述效应细胞中加入VEGF配体，其中，所述VEGF配体能够与所述VEGF受体结合，促使所述效应细胞内的IL-1R3和IL-1R6相互作用并表达所述报告基因；及

加入待测抗VEGF抗体以阻断所述VEGF配体与所述VEGF受体结合，根据所述抗VEGF抗体的加入量与所述报告基因表达量的参数曲线确定所述待测抗VEGF抗体的活性；

所述转染了VEGF受体、IL-1R3、IL-1R6以及报告基因的效应细胞通过如下方法构建得到：

用含有报告基因的载体转染宿主细胞，获得含有报告基因的宿主细胞；及

向所述含有报告基因的宿主细胞中转染第一载体和第二载体，其中所述第一载体中含有VEGF受体、IL-1R3基因以及抗性标记物，所述第二载体中含有VEGF受体、IL-1R6基因以及抗性标记物；

经所述抗性标记物筛选获得稳定表达VEGF受体、IL-1R3、IL-1R6以及报告基因的宿主细胞，得到所述效应细胞。

2.根据权利要求1所述的测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，所述加入待测抗VEGF抗体以阻断所述VEGF配体与所述VEGF受体结合的操作之前，还包括：

向激活后的所述效应细胞中加入VEGF配体，并加入梯度已知浓度的抗VEGF抗体以阻断所述VEGF配体与所述VEGF抗体结合，获得各个浓度的所述抗VEGF抗体对应的报告基因表达量；及

建立所述抗VEGF抗体的加入量与所述报告基因表达量的参数曲线。

3.根据权利要求1所述的测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，所述宿主细胞为悬浮生长细胞。

4.根据权利要求1所述的测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，所述VEGF受体为VEGFR2。

5.根据权利要求1所述的测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，所述抗性标记物选自G481和zeo中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，所述报告基因具体为荧光素酶报告基因。

7.根据权利要求1所述的测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，所述VEGF配体选自VEGF-165和PIGF中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，所述抗VEGF抗体选自贝伐珠单抗、VEGF Trap、雷莫芦单抗及雷珠单抗中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的测定抗VEGF抗体活性的方法，其特征在于，所述用anti-CD3抗体和anti-CD28抗体激活所述效应细胞的操作之前，还包括将所述效应细胞制备成细胞悬液，所述细胞悬液的浓度为1×10⁴个/孔～1×10⁶个/孔。