[发明专利]一株产抗癌活性物质的公牛链霉菌菌株发酵方法及其次级代谢产物的提取方法

权利要求书

1.一株产抗癌活性物质的公牛链霉菌菌株，其特征在于，所述放线菌为公牛链霉菌，命名为公牛链霉菌(Streptomyces tauricus)FGR-015，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2018年6月14日，保藏编号为CGMCC No.15942。

2.根据权利要求1所述的一株产抗癌活性物质的公牛链霉菌菌株的发酵方法，其特征在于，包括有种子发酵和扩大培养发酵：

所述种子培养基组成为：马铃薯淀粉15g，葡萄糖5g，大豆粉10g，氯化钠1g，酵母提取物5g，碳酸钙5g，蒸馏水1000mL；pH值调节为7.1；种子的发酵方法为：接种量为5％～25％，装瓶量为20％～70％，摇床转速为120～170r/min，摇床温度为22～32℃，发酵时间为4～5d；

所述扩大培养基组成为：可溶性淀粉20g，KNO₃ 0.1g，K₂HPO₄ 0.05g，MgSO₄·7H₂O0.05g，NaCl 0.05g，FeSO₄·7H₂O 0.001g，蒸馏水1000mL，pH值调节为7.1；扩大发酵方法为：种子接种量为12.61％，装瓶量为48.65％，摇床转速为150r/min，摇床温度为28℃，发酵时间为7.5d。

3.公牛链霉菌(Streptomyces tauricus)FGR-015菌株次级代谢产物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将权利要求2所述的发酵方法制备得到的扩大发酵产物，以离心转速为10000r/min，4℃离心20min，弃沉淀物；

2)将步骤1)得到的离心上清液以乙酸乙酯为萃取剂萃取；具体为，以30℃水浴超声30min，然后移入梨型分液漏斗中，静置2h；以乙酸乙酯为萃取剂，料液比为1:5，超声温度为44℃，提取时间为16h；用乙酸乙酯萃取3次；分离有机相，直至待测溶液为无色，将有机相保留并经过60℃旋转蒸发、-20℃结冰及-80℃冷冻干燥3d；

3)将步骤1)得到的离心上清液以丙酮为萃取剂萃取；具体为，于4000r/min的离心机中将上清液与等量的丙酮充分混匀，用丙酮萃取3次；分离有机相，直至待测溶液为无色，将有机相保留并经过60℃旋转蒸发、-20℃结冰及-80℃冷冻干燥3d。