[发明专利]一种提高分枝杆菌辅酶再生同时促进雄烯二酮生产的方法在审
| 申请号： | 201810861279.0 | 申请日： | 2018-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN108913643A | 公开（公告）日： | 2018-11-30 |
| 发明（设计）人： | 申雁冰;王敏;苏立秋;夏梦雷;骆健美;商志华;许双平 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/53;C12P33/02;C12R1/32 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 栗华楠 |
| 地址： | 300222 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分枝杆菌 雄烯二酮 单加氧酶 辅酶再生 植物甾醇 甾醇 生物催化技术 菌体生物量 重组微生物 转化微生物 代谢途径 发酵系统 周期缩短 转化效率 菌体 酶活 甾体 代谢 再生 生产 引入 转化 发现 | ||
1.甾醇C27单加氧酶基因cyp125-3在提高新金分枝杆菌中雄烯二酮产量中的应用，其特征在于，通过在新金分枝杆菌中过表达cyp125-3基因实现。
2.一种产雄烯二酮的基因工程菌，其特征在于，是以新金分枝杆菌为宿主细胞，过表达甾醇C27单加氧酶基因cyp125-3获得的。
3.权利要求2所述的一种产雄烯二酮的基因工程菌，其特征在于，所述新金分枝杆菌具体为新金分枝杆菌(Mycobacterium sp.)MNR M3，编号CICC 21097。
4.权利要求2所述的一种产雄烯二酮的基因工程菌，其特征在于，表达载体为质粒pMV306。
5.权利要求2-4任意一项所述产雄烯二酮的基因工程菌的构建方法，其特征在于，具体如下：
(1)将cyp125-3基因和表达质粒pMV261通过酶切，连接，构建pMV261-cyp125-3重组质粒；
(2)将重组质粒pMV261-cyp125-3及质粒pMV306进行酶切，回收pMV261-cyp125-3中的启动子和目的基因片段，与酶切后的pMV306连接，构建pMV306-cyp125-3重组质粒；
(3)将重组质粒pMV306-cyp125-3导入新金分枝杆菌的感受态细胞中，获得的阳性转化子。
6.权利要求2-4任意一项所述产雄烯二酮的基因工程菌的应用。
7.权利要求6所述的应用，其特征在于，利用所述基因工程菌发酵生产雄烯二酮的方法，具体如下：
将菌种经种子培养后，按5-10％的接种量接种入发酵培养基中，28-32℃，130-250r/min，pH6.5-7.8条件下，发酵4-6天；
所述发酵培养基组成如下：K2HPO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，柠檬酸铁铵0.05g/L，柠檬酸2g/L，磷酸氢二铵3.5g/L，葡萄糖10g/L，羟丙基β-环糊精25mM，植物甾醇3g/L，其余为水，pH6.5-7.8。
8.权利要求1或2所述的cyp125-3基因，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ IDNO.1所示。
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