[发明专利]一种基于Au@Ag核壳结构比色检测卡那霉素的方法

说明书

本发明公开了一种基于Au@Ag核壳结构比色检测卡那霉素的方法，包括以下步骤：(1)设计与合成核酸适配体片段；(2)制备Au@Ag核壳结构纳米粒子；(3)取离心管，将浓度为10nM～50nM的核酸适配体和浓度为10nM～50nM的NaCl加入到1500μL的PBS缓冲液中，再加入待测样品，混合并在室温下稳定20min，然后向离心管中加入500μL的纳米溶液，扫描其紫外可见吸收光谱；(4)根据线性方程确定卡那霉素浓度，线性方程为：y＝0.00011x+0.39901；本发明的方法可实现食品中卡那霉素的简易迅速、高灵敏的检测，能够满足实际样品对卡那霉素的检测需求。

技术领域

本发明涉及一种检测卡那霉素的方法，具体是一种基于Au@Ag核壳结构比色检测卡那霉素的方法，属于食品安全技术领域。

背景技术

卡那霉素作为一种广谱抗菌素，属于氨基糖苷类，可以与核糖体结合，达到抑制蛋白质生物合成的作用，因其效果显著，价格低廉，在我国是一种应用广泛的兽药。但是氨基糖苷类抗生素具有较强的副作用和毒性，长期接触容易引起听力减退，肾脏损害，甚至能透过胎盘屏障而使胎儿受损等。卡那霉素可在动物源食物中残留，通过食物链富集作用传给人类，危害人类的身体健康。随着人们生活质量水平的提高，对食品安全的要求也越来越严格，而且我国也规定了其在畜产品中的最高残留量，故它的检测限问题也越来越受到人们的重视，成为研究的热点。

目前，卡那霉素的检测方法分为微生物法、高效液相色谱法、分光光度法、电化学法等。上述方法虽然结果较为准确，但微生物法操作复杂，耗时，特异性、灵敏度欠佳，高效液相色谱法需要大型仪器设备，花费高，所以一般都很难用于现场快速检测，基于此亟需开发一种新型的检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于Au@Ag核壳结构比色检测卡那霉素的方法，可实现食品(不限于食品)中卡那霉素的简易迅速、高灵敏的检测。

为了达到上述技术目的，本发明的技术方案是：

一种基于Au@Ag核壳结构比色检测卡那霉素的方法，包括以下步骤：

(1)设计与合成核酸适配体片段；

设计一段能够对卡那霉素具有特异性亲和力而结合的DNA片段，通过DNA合成仪制备序列，DNA：5’-AGA TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA-3’

(2)制备Au@Ag核壳结构纳米粒子，所述Au@Ag核壳结构纳米粒子的制备方法：

1)以柠檬酸三钠还原硝酸银获得金纳米粒子，所述金纳米粒子的粒径为25nm，最大吸收峰在523nm。

2)将制备好的金纳米粒子浓缩10倍冷却至室温，4℃保存待用。

3)将500μL0.1M磷酸缓冲液和100μL1％聚乙烯吡咯烷酮溶液和50μL0.1M抗坏血酸混合，加入浓缩的纳米金，再加入1mM的硝酸银溶液，混合均匀，得到Au@Ag核壳结构纳米粒子。

(3)取离心管，将浓度为10nM～50nM的核酸适配体和浓度为10nM～50nM的NaCl加入到1500μL的PBS缓冲液中，再加入待测样品，混合并在室温下稳定20min，然后向离心管中加入500μL的纳米溶液，扫描其紫外可见吸收光谱。

鉴于核酸适配体的量和NaCl会直接影响到检测的结果，为选择最优化的量，取6个2mL离心管，均加入1500μL磷酸缓冲液(0.2M PBS,pH 7.4)，在每个试管中加入NaCl，使其最终浓度分别为0，10，20，30，40和50nM，然后向其中加入500μL的纳米溶液。根据紫外可见光图谱显示，当NaCl的浓度为30nM时，吸收值最小，则纳米粒子团聚程度最大，可知NaCl的最优浓度为30nM。