[发明专利]一种检测TRECs和KRECs基因的实时荧光定量PCR试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测TRECs和KRECs基因的实时荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒中包括：1)DNA提取试剂，2)包含TRECs基因、KRECs基因和TRAC基因插入序列的标准品，3)包含TRECs基因、TRAC基因的荧光PCR引物和检测探针的荧光PCR反应液I，4)包含KRECs基因、TRAC基因的荧光PCR引物和检测探针的荧光PCR反应液II。

2.如权利要求1所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述TRECs基因的荧光PCR引物包含TRECs荧光PCR正向引物和反向引物；所述TRAC基因的荧光PCR引物包含TRAC荧光PCR正向引物和反向引物；所述KRECs基因的荧光PCR引物包含KRECs荧光PCR正向引物和反向引物；所述检测探针为TRECs检测探针、TRAC检测探针或KRECs检测探针。

3.如权利要求2所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述荧光PCR反应液I是由TRECs荧光PCR正向引物、反向引物和TRECs检测探针，TRAC荧光PCR正向引物、反向引物和TRAC检测探针，2X real time Mix和无菌的超纯水组成；所述TRECs荧光PCR正向引物和反向引物的含量分别为300-1000nM，优选为400nM；所述TRAC荧光PCR正向引物和反向引物的含量分别为300-1000nM，优选为400nM；所述TRECs检测探针和TRAC检测探针的含量分别为50-250nM，优选为100nM。

4.如权利要求3所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述TRECs荧光PCR正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示，TRECs检测探针的序列如SEQ ID NO.3所示；TRAC荧光PCR正向引物的序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.8所示，TRAC检测探针的序列如SEQ ID NO.9所示。

5.如权利要求2所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述荧光PCR反应液II是由KRECs荧光PCR正向引物、反向引物和KRECs检测探针，TRAC荧光PCR正向引物、反向引物和TRAC检测探针，2X realtime Mix和无菌的超纯水组成；所述KRECs荧光PCR正向引物和反向引物的含量分别为300-1000nM，优选为400nM；所述TRAC荧光PCR正向引物和反向引物的含量分别为300-1000nM，优选为400nM；所述KRECs检测探针、TRAC检测探针含量分别为50-250nM，优选为100nM。

6.如权利要求5所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述KRECs荧光PCR正向引物的序列如SEQ ID NO.4所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.5所示，KRECs检测探针的序列如SEQ ID NO.6所示；TRAC荧光PCR正向引物的序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.8所示，TRAC检测探针的序列如SEQ ID NO.9所示。

7.如权利要求2所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，荧光PCR反应液I和荧光PCR反应液II中的所述TRECs检测探针、KRECs检测探针和TRAC检测探针均为Taqman探针，标记Taqman探针5’端的为荧光发光基团，其是FAM、VIC、TET、JOE、ROX、CY3、CY5、HEX中的一种；标记3’端的为荧光淬灭基团，其是TAMRA、BHQ1中的一种。

8.如权利要求7所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述TRECs检测探针的5’端为HEX荧光基团，3’端为TAMRA荧光淬灭基团；所述KRECs检测探针的5’端为HEX荧光基团，3’端为TAMRA荧光淬灭基团；所述TRAC检测探针的5’端为FAM荧光基团，3’端为TAMRA荧光淬灭基团。