[发明专利]衍生化HPLC法测定药物或其中间体中叠氮化合物的方法

说明书

本发明提供了一种衍生化HPLC法测定药物或其中间体中叠氮化合物的方法，首先在实验温度下，使用联苯酰氯类衍生化试剂对叠氮化合物进行衍生化反应5~60min，反应液作为样品进行检测；以上述生成的衍生化反应液作为样品，利用HPLC‑DAD法在220~300nm之间测定衍生化产物，从而实现对药物或其合成中间体中叠氮化合物的定量检测。本发明能够避免药物或合成中间体本身带来的基质干扰，建立一种灵敏度高、专属性强、简单通用的柱前衍生化方法继而以HPLC方法测定药物或其合成中间体中叠氮化物的残留量，提高了叠氮化合物检测方法的灵敏度和专属性。

技术领域

本发明属于药物测定技术领域，具体涉及一种衍生化HPLC法对药物或其合成中间体中叠氮化物的分析检测方法。

背景技术

随着基因毒性杂质法规的逐步健全，国家药监部门对基因毒性杂质的监管要求越来越高。近些年，在产品的上市申请中，由于基因毒性杂质控制不合规而导致的缺陷越来越多。充分的基因毒性杂质研究已经成为产品能否成功上市的关键^[1]。基因毒性杂质可能会引起DNA突变、染色体断裂或者DNA重组，这类杂质还可能导致人类肿瘤的发生^[2-4]。同时，基因毒性杂质性质活泼、稳定性差，因此有必要建立专属性强、灵敏度高的分析方法以监测药物中的基因毒性杂质残留。

叠氮化合物是常见的基因毒杂质之一，同时也是药物合成过程中的关键中间体，如头孢哌酮钠、头孢孟多酯钠、缬沙坦、坎地沙坦、齐多夫定等。该类化合物能够抑制细胞色素氧化酶及多种酶的活性，并导致磷酸化及细胞呼吸的异常^[5-6]，其主要急性毒作用是能够引起血管张力极度降低，因此在药物生产过程中必须严格控制药物及其中间体叠氮化物的含量。

在各类分析方法中，HPLC法因其分离效能高、选择性高、方法简单、分析速度快等优点成为实验室、药厂质量控制的首选方法。但由于有些基因毒性杂质紫外吸收较弱，检测限度较低，用HPLC法直接检测存在着缺陷与不足，无法达到所需的检测目的。文献中也有报道使用3，5-二硝基苯甲酰氯和DBA(炔)作为衍生化试剂辅以HPLC的方法测定叠氮化物^[7-8]，但是该方法在实际应用的过程中常常遇到两个方面的问题：1)灵敏度不够高，在对叠氮化物检测限度要求比较低的情况下难以满足需求；2)3，5-二硝基苯甲酰氯与叠氮化合物形成的衍生物有时与样品中的其它成分极性比较相似，在HPLC中的保留时间也比较接近，检测的结果受到干扰。

1.Snodin,D.J.,Elder,D.P.Genotoxic impurities part 1:general overview.

2.Benigni,R.,Bossa,C.Mechaisms of chemical carcinogenicity andmutagenicity:a review with implications for predictive toxicology[J].ChemRev,2011,111(4):2507-2536.

3.Sitaram,C.,Rupakula,R.B.Determination of alkyl methanesulfonates indoxazosin mesylate by gas chromatography mass spectrometer[J].Indian J PharmSci,2011,73(1):107-110.

4.Gricar,M.,Andrensek,S.Determination of azide impurity in sartansusing reversed-phase HPLC with UV detection[J].Journal of Pharmaceutical andBiomedical Analysis,2016,125:27–32.