[发明专利]一种从哺乳动物癌组织制备的类癌组织、方法及用途在审
| 申请号: | 201810844841.9 | 申请日: | 2018-07-27 |
| 公开(公告)号: | CN108823169A | 公开(公告)日: | 2018-11-16 |
| 发明(设计)人: | 章真;华国强;徐小雅;姚晔;杨立峰;高建军 | 申请(专利权)人: | 复旦大学附属肿瘤医院;复旦大学 |
| 主分类号: | C12N5/09 | 分类号: | C12N5/09;C12Q1/02 |
| 代理公司: | 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) 31287 | 代理人: | 于晓菁 |
| 地址: | 200032 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 癌组织 哺乳动物 专用培养基 基质胶 离心管 消化液 细胞 制备 高效培养 细胞悬液 培养基 放化疗 培养板 可用 润洗 重悬 解冻 接种 凝固 消化 评估 应用 | ||
1.一种从哺乳动物癌组织制备类癌组织的方法,包括以下步骤:
A1)将从哺乳动物分离的癌组织置于专用消化液中进行消化,分离为细胞;
A2)将细胞置于用BSA润洗的离心管中,离心,去上清;
A3)向离心管加入专用培养基,重悬细胞;
A4)将细胞悬液与解冻的基质胶混合,接种于培养板,待基质胶凝固,加入专用培养基培养。
2.如权利要求1所述的方法,专用消化液包括:DMEM培养基,胎牛血清,胶原酶IV和胶原酶II。
3.如权利要求2所述的方法,胎牛血清的浓度为0.2%-20%。
4.如权利要求3所述的方法,胎牛血清的浓度为0.5%-1%。
5.如权利要求2所述的方法,胶原酶IV的浓度为200-700U/ml。
6.如权利要求5所述的方法,胶原酶IV的浓度为500-600U/ml。
7.如权利要求2所述的方法,胶原酶II的浓度为1-5mg/ml。
8.如权利要求7所述的方法,胶原酶II的浓度为1.5-3.5mg/ml。
9.如权利要求1所述的方法,消化时间为30-50min。
10.如权利要求1所述的方法,所述专用培养基包括:DMEM/F12培养基、R-spondin1蛋白、表皮细胞生长因子、前列腺素E-2。
11.如权利要求1所述的方法,还包括以下步骤:
B1)将哺乳动物分离的癌组织置于含抗生素的PBS内洗涤。
12.如权利要求1所述的方法,所述哺乳动物包括人。
13.如权利要求12所述的方法,所述人癌组织包括结肠癌组织、直肠癌组织。
14.一种类癌组织,采用权利要求1-13任意一项所述的方法培养。
15.如权利要求14所述的类癌组织,所述类癌组织为直肠癌类癌组织。
16.如权利要求15所述的类癌组织,其形态包括:空腔型、致密实体型、分化型。
17.权利要求15或16所述的类癌组织在评估直肠癌术前新辅助放化疗的疗效中的应用。
18.采用权利要求15或16的类癌组织评估直肠癌术前新辅助放化疗的疗效的方法包括:评估类癌组织对放疗和化疗的敏感性。
19.如权利要求18所述的方法,化疗药物包括5-Fu、CPT-11。
20.如权利要求18所述的方法,类癌组织对放疗和化疗的敏感性采用类癌组织存活数评估。
21.如权利要求18所述的方法,放疗敏感性观察时间至少为放疗后9天。
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