[发明专利]一种从乌药中分离去甲异波尔定的方法

说明书

本发明公开了一种从乌药中分离去甲异波尔定的方法，经过制备乌药粗提取液、初步纯化和分离纯化乌药粗提取物，得到去甲异波尔定；本发明合理的利用高速逆流色谱技术，可以实现高效率、简便、快捷从乌药中提取得到去甲异波尔定的效果；并且提取得到的去甲异波尔定的纯度高；同时本发明提供的技术方案提取效率高，提取过程去甲异波尔定的损耗率低，具有优异的发展前景。

技术领域

本发明涉及天然产物活性成分的分离纯化技术领域，具体为一种从乌药中分离去甲异波尔定的方法。

背景技术

乌药为樟科山胡椒属植物乌药(Lindera aggregata(Sims)Kos-term.)的干燥块根，主产于浙江、湖南、广东、安徽等地，是一种重要的常用中药材。乌药具有治疗风湿痛、经痛、改善中枢神经系统、镇痛、抗炎以及胃肠道双向调节作用，既能促使胃肠蠕动，又能缓解胃肠道平滑肌痉挛，还可以改善功能性胃肠病患者泛酸、嗳气、食欲不振、腹胀、腹痛、腹泻便秘等临床症状。研究表明，乌药中化学成分主要有倍半萜及内酯、异喹啉生物碱等，其中异喹啉类生物碱具有广泛的生理活性，具有抗菌、抗肿瘤、镇痛、抗心律失常、抗血小板聚集、降压、调节免疫等功能，同时副作用较小，具有很高的开发利用价值。去甲异波尔定是乌药中的主要异喹啉生物碱，不仅具有体外抗氧化作用(药学学报200641(10)：956～962)，还可用于治疗自身免疫性疾病，如：多肌炎、慢性活动性肝炎、混合性结缔组织病、原发性胆汁性肝硬变、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性噬中性白细胞减少症、狼疮性肾炎、慢性萎缩性胃炎、自身免疫性不育、子宫内膜异位症等疾病，在临床上具有重要应用价值。

但是，现有技术中并没有公开一种从乌药中快速、高效、稳定地提取去甲异波尔定的方法。而高速逆流色谱法是一种近年来快速发展的、连续高效的液液分配色谱技术，已在生物、医药、食品、材料等领域得到广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。

因此，提供一种利用高速逆流色谱分离乌药中去甲异波尔定的方法，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种利用高速逆流色谱分离乌药中去甲异波尔定的方法，以实现高效率、简便、快速的从乌药中分离去甲异波尔定的技术效果。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种分离乌药中去甲异波尔定的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)制备乌药粗提取液：将乌药经过蒸馏水浸泡、浸提、过滤和离心分离过程，得到乌药粗提取液；

(2)初步纯化：利用大孔吸附树脂柱，依次使用蒸馏水和质量浓度为70％的乙醇对上述制备得到的乌药粗提取液进行洗脱，得到的乙醇洗脱液经过浓缩、冷冻干燥后得到乌药粗提取物；

(3)分离纯化乌药粗提取物：利用高速逆流色谱对上述乌药粗提取物进行分离提纯，得到去甲异波尔定。

优选的，所述步骤(1)具体包括如下步骤：

(a)称取乌药原料，并称取3～5倍质量的蒸馏水；将乌药加入到蒸馏水中浸泡过夜；

(b)然后在70～100℃水浴条件下浸提30～60min，并适时搅拌，接着进行过滤分别得到滤液和滤渣；

(c)向上述得到的滤渣中加入3倍质量的蒸馏水，并重复上述步骤(b)；

(d)合并步骤(b)和步骤(c)得到的滤液，经过离心分离，得到上清液即为乌药粗提取液。

优选的，所述步骤(2)具体包括如下步骤：

(A)先量取500mLAB-8大孔吸附树脂用95％乙醇浸泡12～24h，装柱；然后使用蒸馏水对上述大孔吸附树脂柱进行洗涤至流出液无醇味；