[发明专利]pSP107质粒及其应用、构建方法

说明书

pSP107质粒及其应用、构建方法，属于生物技术领域。本发明提供了一种新的质粒pSP107质粒、以及该pSP107质粒的应用和构建方法。本发明的质粒可以转化到UET2和UEMT2原生质体中，获得UeTSP菌株和UeMTSP菌株，这两种菌株可以侵染茭白使茭白孕茭，为人工孕茭提供了一种新的思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及pSP107质粒及其应用、构建方法。

背景技术

菰黑粉菌（Ustilago esculenta）是一种独特的病原真菌，其侵染茭白植株（Zizania latifolia）后可抑制植株抽穗开花并刺激茎基部膨大形成可食用的茭白。在东亚及东南亚地区尤其是中国，茭白是一种营养很高的水生蔬菜，也是一种重要的药材。但是田间常出现充满冬孢子的灰茭和少量冬孢子形成的芝麻茭，误食后易形成肺炎，不利于茭白产业的发展。鉴于人工育种技术的成功开发，如何控制茭白中菰黑粉菌冬孢子的形成将是茭白人工育种的一大关键。

前期研究发现，菰黑粉菌与其他二型态真菌类似，存在酵母型和菌丝型两种型态，而由酵母型向菌丝型转换是此类真菌致病性的关键。在菰黑粉菌中，其二型态转换受到a，b基因的调控，需要两个性亲和单倍体融合形成双核菌丝，在侵染过程中受环境因子影响菌丝内两个细胞核核融形成一个二倍体的核从而产生二倍体的冬孢子。

申请人在长期研究过程中发现自龙茭2号灰茭中分离得到单倍体菌株UET1（交配基因型为a1b1，该菌株在CN 105838616 A的发明专利中已经公开，保藏号为CGMCCNo.11843）、UET2（交配基因型为：a2b2，该菌株在CN105838615A的发明专利中已经公开，保藏号为：CGMCC No.11844）、UEMT3（交配基因型为a3b3，该菌株在CN105838617A的发明专利中已经公开，保藏号为：CGMCC No.11842）和UEMT2（交配基因型为a2b2，该菌株在CN105838618A的发明专利中已经公开，保藏号为：CGMCC No.11841）。当UET1与UET2或当UEMT3与UEMT2两个性亲和菰黑粉菌共培养时，两个性亲和菰黑粉菌共培养时，体外培养的菌落从酵母型向菌丝型转变，菌落生长气生菌丝，菌丝可以侵染茭白，使茭白孕茭，但是容易产生灰茭。

基于上述问题，申请人成功构建pSP107质粒，经试验发现该质粒经原生质体转化，可获得单倍体的可产生菌丝的UeTSP菌株和UeMTSP菌株，该菌株可成功侵染茭白。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种pSP107质粒及其应用、构建方法的技术方案。

所述的一种带有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的pSP107质粒。

所述的pSP107质粒作为菰黑粉菌UET2或UEMT2的原核表达载体的应用。

所述的pSP107质粒作为菰黑粉菌UET2或UEMT2的原核表达载体获得UeTSP和UeMTSP菌株的应用，所述的UeTSP和UeMTSP菌株能够侵染茭白使茭白孕茭。

所述的pSP107质粒的构建方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）获得菰黑粉菌UET1菌株基因组DNA；

2）以菰黑粉菌UET1菌株基因组DNA为模板，以mfa1.2F和mfa1.2R，bE1F和bE1R为引物进行PCR,获得mfa1.2和bE1基因序列，所述的mfa1.2F的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，mfa1.2R的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，bE1F的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，bE1R的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；