[发明专利]一种菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP及其应用

说明书

一种菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP及其应用，属于生物技术领域。本发明一方面提供了一种新的菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP，另一方面提供了菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP在孕茭中的用途。本发明的有益效果：本发明的菰黑粉菌（Ustilago esculenta）单倍体菌株UeTSP能够直接侵染茭白植株，使茭白孕茭，而不产生冬孢子，即不形成灰角这种不利的表型，为茭白人工孕茭提供了一种新思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP及其应用。

背景技术

菰黑粉菌（Ustilago esculenta）是一种独特的病原真菌，其侵染茭白植株（Zizania latifolia）后可抑制植株抽穗开花并刺激茎基部膨大形成可食用的茭白。在东亚及东南亚地区尤其是中国，茭白是一种营养很高的水生蔬菜，也是一种重要的药材。但是田间常出现充满冬孢子的灰茭和少量冬孢子形成的芝麻茭，误食后易形成肺炎，不利于茭白产业的发展。鉴于人工育种技术的成功开发，如何控制茭白中菰黑粉菌冬孢子的形成将是茭白人工育种的一大关键。

前期研究发现，菰黑粉菌与其他二型态真菌类似，存在酵母型和菌丝型两种型态，而由酵母型向菌丝型转换是此类真菌致病性的关键。在菰黑粉菌中，其二型态转换受到a，b基因的调控，需要两个性亲和单倍体融合形成双核菌丝，在侵染过程中受环境因子影响菌丝内两个细胞核核融形成一个二倍体的核从而产生二倍体的冬孢子。

申请人在长期研究过程中发现自龙茭2号灰茭中分离得到单倍体菌株UET1（交配基因型为a1b1，该菌株在CN105838616 A的发明专利中已经公开，保藏号为CGMCCNo.11843）和UET2（交配基因型为：a2b2，该菌株在CN105838615A的发明专利中已经公开，保藏号为：CGMCC No.11844）。当UET1与UET2两个性亲和菰黑粉菌共培养时，体外培养的菌落从酵母型向菌丝型转变，菌落生长气生菌丝，菌丝可以侵染茭白，使茭白孕茭，但是容易产生灰茭。由于上述情况的出现，对人工孕茭带来不必要的麻烦。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP及其应用的技术方案。

本发明提供了一种菰黑粉菌（Ustilago esculenta）单倍体菌株UeTSP，该菌株于2018年06月11日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCCNo.15929。保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明还提供了一种菰黑粉菌（Ustilago esculenta）单倍体菌株UeTSP的应用，该菰黑粉菌（Ustilago esculenta）单倍体菌株UeTSP能够侵染茭白植株使茭白正常孕茭。

本发明还提供了一种菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP的获得方法，其特征在于包括以下步骤：

1）获得UET1菌株基因组DNA；

2）以UET1菌株基因组DNA为模板，以mfa1.2F和mfa1.2R，bE1F和bE1R为引物进行PCR,获得mfa1.2和bE1基因序列，所述的mfa1.2F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，mfa1.2R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，bE1F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，bE1R的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；