[发明专利]一种菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP及其应用

权利要求书

1.一种菰黑粉菌（Ustilago esculenta）单倍体菌株UeTSP，保藏号为：CGMCCNo.15929。

2.如权利要求1所述的一种菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP在侵染茭白植株使茭白正常孕茭中的应用。

3.如权利要求1所述的一种菰黑粉菌单倍体菌株UeTSP的获得方法，其特征在于包括以下步骤：

1）获得UET1菌株基因组DNA；

2）以UET1菌株基因组DNA为模板，以mfa1.2F和mfa1.2R，bE1F和bE1R为引物进行PCR,获得mfa1.2和bE1基因序列，所述的mfa1.2F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，mfa1.2R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，bE1F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，bE1R的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

3）用mfa1.2F和bE1R引物，以mfa1.2和bE1基因序列为模板，进行融合PCR，将mfa1.2和bE1基因连接成一个长片段；

4）将融合PCR产物和pUMa932质粒经限制性内切酶ECORⅤ和HindⅢ双酶切2h后的产物，连接后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中，挑取单克隆培养后提取重组质粒，测序确认后获得重组质粒mfa1.2-bE1-amp-cbx；

5）使用限制性内切酶PvuⅠ线性化重组质粒mfa1.2-bE1-amp-cbx，利用PEG介导的转化将线性化的片段转入UET2原生质体中，涂布于含50μg/mL萎锈灵的双层再生培养基上，28℃培养4-5天，随后挑取转化子至含有萎锈灵的YEPS固体培养基上，然后挑取单菌落扩大培养，观察菌落是否有菌丝生长，获得UeTSP菌株。