[发明专利]一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法及其应用，属于中药技术领域。将供试品溶液和对照品溶液分别进行超高效液相色谱分析，色谱条件为以0.1%甲酸水为流动相A，以0.1%甲酸甲醇为流动相B，进行梯度洗脱，柱温30℃，进样量5μL，流速0.2mL/min，检测波长280nm，分析定坤丹指纹图谱信息共获得22个共有峰。采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试品溶液、对照品溶液的液相色谱进行数据匹配，即得标准指纹图谱。本发明建立的定坤丹指纹图谱能够较全面的反映定坤丹的物质信息，可准确有效评价和控制定坤丹的质量。

技术领域

本发明涉及中药指纹图谱的构建方法，特别涉及一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，及其在定坤丹质量监控方面的应用。

背景技术

定坤丹是由红参、鹿茸、西红花、三七、白芍、熟地黄、当归、白术、枸杞子、黄芩、香附、茺蔚子、川芎、鹿角霜、阿胶、延胡索等药味经加工制成的大蜜丸，可滋补气血，调经舒郁。该方组方十分复杂，药味众多，为保持这一中药大复方不同批次产品具有稳定的功效，就必须制定严格的企业内控质量标准。2015版《中国药典》规定定坤丹的质量控制标准包括：显微鉴别枸杞子、白术、黄芩、甘草；薄层鉴别当归、川芎、枸杞子、白芍、红参、三七对照药材以及芍药苷、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、三七皂苷R₁对照品；含量测定规定本品每丸含红参和三七以人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）计，不得少于3.0mg。因定坤丹成分复杂，其中任何一种药材均不能评价整体复方的质量，一个或几个化学成分则更不能够准确评价复方的质量。现行质量控制标准并不能反映复方的整体质量。

从整体上综合分析评价定坤丹方可提升复方质量均一性，故可利用高效液相色谱建立定坤丹的指纹图谱，综合反映不同生产批次定坤丹主要成分差异，为其内在质量特征评价和等级分类提供科学依据。目前，关于定坤丹的高效液相色谱指纹图谱研究尚未见文献报道，为保障患者用药安全有效，本发明建立了一种适用于定坤丹质量控制的指纹图谱检测方法。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法及其应用，该方法可以客观、全面、准确的评价定坤丹的质量，具有方法简单、操作方便、耗时短的优势，对控制定坤丹的内在质量具有重要意义。

本发明采用的技术方案是：一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备

取定坤丹切碎，称取1g，精密称定，加等量硅藻土，研匀，加入甲醇50ml，超声处理至少30min，滤过，旋转蒸发回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备

精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、黄芩苷、藁本内酯对照品并溶于甲醇，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液；

（3）色谱条件

色谱柱：Water Acquity UPLC HSS T3，1.8μm；流动相以0.1%甲酸水为流动相A，以0.1%甲酸甲醇为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为：

0min时，流动相A 所占的体积比为98%，流动相B所占的体积比为2%；

5min时，流动相A 所占的体积比为93%，流动相B所占的体积比为7%；

16min时，流动相A所占的体积比为56%，流动相B所占的体积比为44%；

17.5min时，流动相A所占的体积比为56%，流动相B所占的体积比为44%；