[发明专利]一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备

取定坤丹切碎，称取1g，精密称定，加等量硅藻土，研匀，加入甲醇50ml，超声处理至少30min，滤过，旋转蒸发回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备

精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、黄芩苷、藁本内酯对照品并溶于甲醇，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液；

（3）色谱条件

色谱柱：Water Acquity UPLC HSS T3，1.8μm；流动相以0.1%甲酸水为流动相A，以0.1%甲酸甲醇为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为：

0min时，流动相A 所占的体积比为98%，流动相B所占的体积比为2%；

5min时，流动相A 所占的体积比为93%，流动相B所占的体积比为7%；

16min时，流动相A所占的体积比为56%，流动相B所占的体积比为44%；

17.5min时，流动相A所占的体积比为56%，流动相B所占的体积比为44%；

38min时，流动相A所占的体积比为15%，流动相B所占的体积比为85%；

41min时，流动相A所占的体积比为5%，流动相B所占的体积比为95%；

45min时，流动相A所占的体积比为98%，流动相B所占的体积比为2%；

柱温：30℃；进样量：5μL；流速：0.2mL/min；紫外检测波长：280nm；

（4）分别精密吸取步骤（1）制备的供试品溶液和步骤（2）制备的对照品溶液5μL注入超高效液相色谱仪中按照步骤（3）的色谱条件进行测定，分别得到供试品和对照品UPLC图谱；

（5）采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试品溶液和对照品溶液的UPLC图谱进行数据匹配，得到标准指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤（1）中甲醇加入量为每克定坤丹中加入50ml甲醇；所述步骤（1）中超声提取时间为30min。

3.根据权利要求1所述的定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述定坤丹UPLC指纹图谱中有22个共有峰，通过对照品对照及UPLC-MS指认，鉴别了定坤丹UPLC指纹图谱中8种成分，其中1号峰为没食子酸，2号峰为5-羟甲基糠醛，3号峰为芍药内酯苷，4号峰为芍药苷，5号峰为阿魏酸，6号峰为甘草苷，10号峰为黄芩苷，18号峰为藁本内酯。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的定坤丹UPLC指纹图谱构建方法的应用，其特征在于：所述定坤丹UPLC指纹图谱可用于定坤丹品质评价和质量控制。