[发明专利]一种分离、纯化样品中外泌体和/或游离核酸的方法

说明书

本发明属于生物检测技术领域,是一种分离、纯化样品中外泌体和/或游离核酸的方法。利用柱平衡液处理羟基磷灰石纯化柱，使纯化柱上各基团处于活化状态；利用样本平衡液预处理样本；将上述处理后样本加入至上述活化的羟基磷灰石纯化柱进行分离纯化外泌体及游离核酸；利用洗涤液洗涤羟基磷灰石纯化柱，再用不用浓度的洗脱液分别洗脱样品中的外泌体和/或游离核酸。本发明方法操作简单易行、成本低，可快速高效地获得高纯度的外泌体及核酸，且该方法外泌体及核酸与羟基磷灰石吸附温和，便于外泌体、核酸各类相关的下游试验，同时，该方法可以简单快速获得去除90％外泌体的血清，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域,是一种分离、纯化样品中外泌体和/或游离核酸的方法。

背景技术

外泌体(exosomes)是一种含有复杂的蛋白质、脂质和核酸等活性生物分子的具有质膜双分子层结构的微囊泡，直径约为30-150nm，多种细胞在正常及病理状态下均可分泌。外泌体主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。随着对其研究的不断深入，包括对其生物来源、分布、物质构成及运输和细胞间信号传导的研究，发现外泌体具有多种不同的功能。外泌体的功能根据来源细胞类型的不同，可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方方面面。有研究发现被疱疹病毒潜伏感染的细胞通过外泌体选择性释放和转移RNA可触发树突状细胞抗病毒免疫反应(Baglio S.R,et al.(2016)Sensing of latent EBV infectionthrough exosomal transfer of 5'pppRNA.Proc Natl Acad Sci USA 113(5):587–596.)。另研究发现肿瘤细胞转移到脑部后可以被神经胶质细胞分泌的外泌体所改造，其外泌体内部携带的大量的miRNA可以靶向肿瘤细胞内的mRNA从而影响肿瘤细胞内蛋白水平，进而促进肿瘤细胞的增殖，提升肿瘤细胞的抗凋亡能力(Zhang L,et al.(2015)Microenvironment-induced PTEN loss by exosomal microRNA primes brainmetastasis outgrowth.Nature 527(7576):100-104.)。

建立有效的从细胞培养液或生物体液分离外泌体的方法，可以让研究者更好地开展外泌体的相关研究。超速离心是分离外泌体常见且有效的方式，并且可以选用密度梯度离心法得到纯度更高的外泌体。但是，由于该方法耗时长，且仪器设备昂贵，限制了该方法的应用。