[发明专利]一种油用牡丹愈伤组织培养方法

说明书

本发明属于植物愈伤组织培育技术领域，具体涉及一种油用牡丹愈伤组织培养方法。该方法取油用牡丹叶片，洗净，消毒，得到无菌叶片；然后将无菌叶片沿叶片主脉方向切开，即每个叶片均分成两半，再进行诱导培养和增殖培养，分别在诱导培养基和增殖培养基中添加了生姜汁。本发明的方法以油用牡丹叶子为对象，成功培育出油用牡丹愈伤组织，为油用牡丹再生体系的建立奠定了试验基础。

技术领域

本发明属于植物愈伤组织培育技术领域，具体涉及一种油用牡丹愈伤组织培养方法。

背景技术

目前我国野生牡丹品种主要分布在河南、陕西、湖北、甘肃、四川、云南、西藏等地。据不完全统计，大约有100多种具有结实能力。油用牡丹是指子实产量高、含油量高、有效成分高的牡丹品种类型。凤丹牡丹和紫斑牡丹籽中不饱和脂肪酸含量超过90％，其中亚麻酸含量占40％左右。亚麻酸是人力必需氨基酸，具有提神醒脑、增强记忆、降血脂、降血压、预防心脑血管疾病等功效，对人类健康起着关键作用。因此油用牡丹的大量培养不仅具有较佳的观赏效果，还具有很高的药用价值。传统油用牡丹的种植方法主要是种子繁殖和分株繁殖，培养过程中耗时长。

组织培养技术培养的植株能生长健壮，叶片浓绿，且能有效改变果实品质，提高产量，繁殖快，且不受季节约束。常见的组织培养技术是愈伤组织培养，比如南果梨、油用牡丹、胡萝卜等均可用于愈伤组织培养，但是由于油用牡丹的品种较少，传统的植物愈伤组织诱导及继代激素配比并不适用于所有植物的愈伤组织培养，目前尚未发现使用油用牡丹进行愈伤组织培养的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种油用牡丹愈伤组织培养方法，该方法以油用牡丹叶子为对象，成功培育出油用牡丹愈伤组织，为油用牡丹再生体系的建立奠定了试验基础。

本发明提供的一种油用牡丹愈伤组织培养方法，包括以下步骤：

S1，取油用牡丹叶片，洗净，消毒，得到无菌叶片；

S2，诱导：将无菌叶片沿叶片主脉方向切开，即将每个叶片分成两半，将切开后的叶片接种在诱导培养基中，25±2℃培养，直至长出愈伤组织，得到叶片愈伤组织；

所述诱导培养基按以下方法配制：1L水中加入4.74g MS固体培养基、20g蔗糖，加热溶解，调pH至5.8～6.0，然后加入0.1mg的NAA、10～20ml生姜汁、6～8g琼脂，煮沸至琼脂完全溶解，灭菌；

S3，增殖：取出叶片愈伤组织，切块，置于增殖培养基中，25±2℃培养，直至获得白色疏松油用牡丹叶片愈伤组织；

所述增殖培养基按以下方法配制：1L水中加入4.74g MS固体培养基、30g蔗糖，加热溶解，调pH至5.8～6.0，然后加入2mg的6-BA、10～20ml生姜汁、6～8g琼脂，煮沸至琼脂完全溶解，灭菌；

其中，S2和S3中所述生姜汁按照以下方法制备而成：生姜切片后与水按照20g:200ml的比例混合，煮沸5～10min，过滤后收集的滤液为生姜汁。

优选的，上述油用牡丹愈伤组织培养方法，S1中，消毒的具体方式如下：将洗净的油用牡丹叶片用体积分数75％乙醇溶液浸泡消毒，无菌水冲洗，再放入0.1g/100ml的HgCl₂溶液浸泡消毒8min，取出叶片并用无菌水冲洗，吸干水分取出，得到无菌叶片。

优选的，上述油用牡丹愈伤组织培养方法，S1中，洗净油用牡丹叶片沿主脉方向的长度为2～6cm。

优选的，上述油用牡丹愈伤组织培养方法，S1中，S2和S3中所述生姜片的厚度为2～4mm。

与现有技术相比，本发明提供的油用牡丹愈伤组织培养方法，具有以下有益效果：