[发明专利]一种检测及定性大鼠血清中的差异金属蛋白质的方法

说明书

本发明属于生物检测领域，更具体地、涉及一种检测及定性高脂血症大鼠血清中的差异金属蛋白质的方法。本发明通过2D‑ICP‑MS联合MALDI‑TOF‑MS的方法，检测及定性高脂血症大鼠血清中差异金属蛋白质。包括如下步骤：(1)二维电泳法分离血清蛋白质；(2)ICP‑MS检测金属蛋白；(3)MALDI‑TOF‑MS鉴定金属蛋白。该方法原理简单、易行。经实验，本发明能够检测出两种因患高脂血症而带有金属铬的蛋白质谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx‑3)和载脂蛋白aI(ApoaI)。为进一步阐明血脂的代谢机制和高脂血症的治疗提供基础和新思路。

技术领域

本发明属于生物检测领域，更具体地、涉及一种检测及定性高脂血症大鼠血清中的差异金属蛋白质的方法。

背景技术

蛋白质是生物体的基本组成物质，也是生物体各种功能的执行者。研究表明，人体内有三分之一的蛋白与金属元素结合成金属蛋白。而金属离子常常作为活性中心或协同因子完成蛋白质的多种反应。金属蛋白组学主要有三种研究方法。首先是广泛使用的质谱分析技术，特别是电喷雾电离质谱(ESI-MS)和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)。这两种技术特别适用金属蛋白综合结构和功能特征的分析。第二种方法是高通量X射线吸收光谱法(HT-XAS)，以提供对组织和细胞中蛋白质和蛋白质金属分布的直接金属分析。第三种方法是通过计算生物信息学分析。随着基因组测序的进行，已经建立了蛋白质一级结构的大型数据库。目前，还开发了鉴定基因组序列中的金属蛋白的具体工具。将氨基酸序列代入已知金属结合区域中已知的同源序列，可以预测金属结合特性。该方法已被用于预测蛋白质中的锌、铜和其它痕量金属。

目前可用于人体微量元素检测的方法有原子吸收光谱法(AAS)、电感耦合等离子体原子吸收光谱法(ICP-AES)、同位素稀释质谱法(ID-MS)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、x射线荧光分析法(XRF)、中子火花分析法(INAA)、电化学分析法、分子光谱法、生化法等，其中ICP-AES和AAS法是应用最广泛的两个方法，尤其是石墨炉原子吸收光谱法(GF-AAS)，但是ICP-AES法分析生物样品集体效应难以解决，而且有些元素不能测量，如As、Hg、Pb、Cd等，需要再利用GF-AAS技术进行测定。另外，ICP-AES法存在对样品需求量大的问题；GF-AAS不适宜使用有机溶剂，分析速度慢，且基体干扰很严重，测定不同元素时必须采用不同的基体改进剂。其复杂的操作步骤、较低的工作效率限制了它的广泛应用，更重要的是，在分析Hg、Tl、U、B等元素时，GF-AAS的检测限不能满足体液等生物样品的分析要求。ICP-MS技术提供了最低的检出限和最宽的线性范围，而且干扰少、分析速度快、精密度高、可多元素同时测定以及可提供精确的同位素信息等优点。

六十年代开始，质谱广泛地应用与有机化学中分子量和结构的测定，传统的质谱方法能够很好地测定一些分子量较小的化合物，但是在测量生物样品时，由于其极性大、难挥发、不易气化、热不稳定等特点，传统质谱存在局限性。80年代末期，出现了两种新型质谱软电离技术电子喷雾离子化(Electrospray Ionization,ESI)和基质辅助激光解吸离子化(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization,MALDI)，成为生物样品分析中最重要和最有发展前景的技术之一。

因此，目前亟待一种用于复杂样品中差异金属蛋白检测和定性的方法。

发明内容

本发明所解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种用于检测及定性大鼠血清中的差异金属蛋白质的方法。该方法原理简单、易行。经实验，检测出两种因患高脂血症而带有金属铬的蛋白质谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx-3)和载脂蛋白aI(ApoaI)。为进一步阐明血脂的代谢机制和高脂血症的治疗提供基础和新思路。

本发明通过如下方法实现的：

本发明通过2D-ICP-MS联合MALDI-TOF-MS的方法，检测及定性高脂血症大鼠血清中差异金属蛋白质。

本发明所述的方法，包括如下步骤：