[发明专利]一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂及其制备方法

权利要求书

1.一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂，其特征在于；所述一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂包括以下组份：每1ml注射剂中含有500μl-800μl的5％-20％浓度的人关节液间充质干细胞外泌体提取物溶液，其余为5％浓度葡萄糖和8.5％-9％浓度的生理盐水。

2.根据权利要求1所述的一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂，其特征在于：所述人关节液间充质干细胞外泌体提取物溶液为经由离心提纯的浓缩液。

3.根据权利要求1所述的一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂，其特征在于：所述人关节液间充质干细胞外泌体提取物溶液所采用的人关节液间充质干细胞为第三代至带六代干细胞。

4.根据权利要求1所述的一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂，其特征在于：所述人关节液间充质干细胞外泌体提取物溶液的存储温度为零下二十度。

5.根据权利要求1所述的一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂，其特征在于：所述一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂包括以下组份：每1ml注射剂中含有500μl 5％浓度的人关节液间充质干细胞外泌体提取物溶液，其余为5％浓度的葡萄糖。

6.根据权利要求1所述的一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂，其特征在于：所述一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂包括以下组份：每1ml注射剂中含有600μl 10％浓度的人关节液间充质干细胞外泌体提取物溶液，其余为8.5％浓度的生理盐水。

7.根据权利要求1所述的一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂，其特征在于：所述一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂包括以下组份：每1ml注射剂中含有700μl 15％浓度的人关节液间充质干细胞外泌体提取物溶液，其余为9％浓度的生理盐水。

8.根据权利要求1所述的一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂，其特征在于：所述一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂包括以下组份：每1ml注射剂中含有800μl 20％浓度的人关节液间充质干细胞外泌体提取物溶液，其余为9％浓度的生理盐水。

9.如权利要求1-8任意一条所述的所述一种带有人关节液间充质干细胞外泌体提取物的风湿骨痛疾病治疗注射剂的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

S1：获取人关节液间充质干细胞，将获取的人关节液投放入无菌离心管中，并加入PBS缓冲液混合均匀，然后用细胞分离管离心分离获得细胞分离液，将上层清液去除，并将下层沉淀物加入PBS缓冲液中洗涤，再次离心后获得人关节液间充质干细胞；

S2：培养人关节液间充质干细胞，将获得的人关节液间充质干细胞放入培养皿中培养，经培养后在培养皿中生发的人关节液间充质干细胞为第一代人关节液间充质干细胞，将获得的第一代人关节液间充质干细胞经过五次传代培养后获得第二代、第三代、第四代、第五代、第六代人关节液间充质干细胞；

S3：人关节液间充质干细胞外泌体的促分，选择第三代至第六代人关节液间充质干细胞置于含氧量为25％的培养箱中，采用高速培养基进行培养，当细胞回合度为75％时，改用促进外泌体合成与分泌的培养基进行培养3-7天；

S4：人关节液间充质干细胞外泌体提取，将S3中促进外泌体合成与分泌的培养基进行培养3-7天后，静置收取上层清液即人关节液间充质干细胞外泌体，然后将收集的清液经过再次离心提纯后获得人关节液间充质干细胞外泌体提取物的浓缩液，将浓缩液静置于零下二十度封存；

S5：合成注射剂，取5％-20％浓度的人关节液间充质干细胞外泌体提取物的浓缩液分别与8.5％-9％浓度的生理盐水和5％浓度的葡萄糖进行充分搅拌混合后获得注射剂。