[发明专利]用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及应用。所述的试剂盒中含有用于扩增犬瘟热病毒野毒株以及疫苗株H基因保守区域的通用引物以及分别用于鉴别犬瘟热病毒野毒株或疫苗株的特异性探针。实验证明，使用本发明建立的Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒检测鉴别CDV野毒株和疫苗株，灵敏度可达1个拷贝，能检测出的病毒量低至1TCID₅₀/mL，高于常规PCR方法的10³和10²个拷贝，且与5种其他病原核酸检测均呈阴性。因此，使用本发明建立的试剂盒鉴别CDV野毒株和疫苗株具有特异性强、灵敏度高和稳定性好的特点，能够快速鉴别出犬瘟热病毒野毒株和疫苗株感染。

技术领域

本发明涉及一种荧光定量PCR检测试剂盒及其应用，特别涉及一种用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。本发明属于医药技术领域。

背景技术

犬瘟热(Canine Distemper)是由犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus)感染犬、狐貉和水貂等食肉动物而引起的一种急性热性、高度接触性传染病。该病发病率高，临床症状多样，感染后期容易继发混合感染，死亡率高达30％-100％。近年来CDV自然感染宿主不断增多，随着人类对犬猫等宠物拥有数量的增多，犬瘟热病毒在给动物养殖业、生物多样化带来了极大损失和危害的同时，还威胁着社会公共安全。CDV是副黏病毒科麻疹病毒属成员，其基因组为单股负链不分节段RNA。从3’到5’端依次是3’端前导序列、核蛋白(N)基因、磷蛋白(P)基因、基质蛋白(M)基因、融合蛋白(F)基因、血凝素蛋白(H)基因、聚合酶蛋白(F)基因和5’尾随序列。其中，H基因是变异率最高的，是CDV野毒株分子流行病学调查的主要靶基因。基于H基因的多样性，CDV可分为Asia 1、Asia 2、Europe、European wildlife、America-2、Arctic和America-1型(又称疫苗型)。我国流行毒株主要是Asia 1，目前，对CDV的控制，主要采取弱毒活疫苗免疫措施，但疫苗免疫失败的现象却时有发生，甚至引起一定范围疫情暴发。CDV弱毒活疫苗的大规模应用使得CDV野毒感染和疫苗接种的区分变得异常困难，因此，准确、快速鉴别CDV野毒和疫苗毒对控制CDV流行和防止CDV感染蔓延至关重要。