[发明专利]用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及应用

权利要求书

1.用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有用于扩增犬瘟热病毒野毒株以及疫苗株H基因保守区域的通用引物以及分别用于鉴别犬瘟热病毒野毒株或疫苗株的特异性探针，其中，所述的通用引物由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，用于鉴别犬瘟热病毒野毒株的特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，用于鉴别犬瘟热病毒疫苗株的特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述的探针的5’端添加荧光基团，3’端添加淬灭基团。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的探针的5’端添加荧光基团FAM，3’端添加淬灭基团TAMRA。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括用于逆转录反应的试剂以及用于荧光定量PCR检测的试剂。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括阳性对照以及阴性对照。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照包括分别含有犬瘟热病毒野毒株或疫苗株H基因的质粒，所述的阴性对照为无RNA酶水。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于犬瘟热病毒野毒株与疫苗株鉴别时，按照以下步骤进行：

(1)cDNA的合成

提取待测病毒株的总RNA，以提取的RNA为模板，通过逆转录反应合成cDNA；

(2)配制qPCR反应体系

配制反应体系20μL，包括：2×qPCR混合液10μL，上下游引物各0.4μM，用于鉴别犬瘟热病毒野毒株或疫苗株的特异性探针0.2μM，步骤(1)合成的cDNA1μL，用PCR级水补足至20μL；

(3)PCR扩增

将步骤(2)配制好的反应体系放混匀后置Real-Time PCR仪上进行自动化扩增，反应条件为：95℃10min，95℃5s、60℃30s，45个循环；

(4)结果分析

根据扩增结果判定：在阴性对照没有Ct或Cq值的情况下，Ct或Cq值≤40判为阳性；Ct值或Cq>40为阴性。

7.权利要求1-6任一项所述的试剂盒在制备用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的试剂中的应用。