[发明专利]一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2，试剂R1：缓冲液、无机盐、防腐剂、增乳剂、稳定剂，试剂R2：缓冲液、增乳剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂、包被有胱抑素C抗体致敏的胶乳颗粒；所述致敏的胶乳颗粒为二次收敛聚合后的聚苯乙烯胶乳微球，减弱了线性范围高值灵敏度；所述增乳剂平衡了二次收敛聚合对低值灵敏度的影响，提高了抗原过剩检测范围，本试剂盒效地改善HOOK效应导致的被测物浓度被低估甚至出现假阴性结果，且其重复性和稳定性等性能不受影响，操作简单，具有广泛通用性。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒。

背景技术

胱抑素C（CystatinC，简称Cys C）亦称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，是一种由120个氨基酸组成，分子量为13kDa的低分子量、碱性非糖化蛋白质。编码Cys C的基因属于管家基因，能在所有的有核细胞内以恒定速度持续转录与表达，无组织特异性。Cys C存在于各种体液之中，尤以脑脊液和精浆中含量为高，亦可存在于血液、唾液中，尿液中最低，不受年龄、性别、体重、炎症等因素影响，研究表明Cys C自1岁后到60岁前在血液中浓度恒定。因Cys C分子量小，生理条件下带正电荷，能自由从肾小球滤过，完全被肾小管上皮细胞重吸收并于细胞内降解，不重新回到血液中；同时肾小管上皮细胞也不分泌至管腔内，使肾脏成为清除循环中Cys C的唯一场所。

临床评价肾脏疾病进展和严重程度，一般以肾功能为参考，肾功能一般以肾小球滤过率（GFR）反映。目前常用评价肾小球滤过功能的内源性标志物有血清肌酐（Scr）、尿素氮（Urea）、内生肌酐清除率（Ccr）等。但是这些指标会受到年龄、性别、身高、性别、肌肉量、膳食结构、机体疾病状况、药物及肾小管对肌酐的分泌等因素的影响，不能满足理想内源性标志物的要求。肾脏是清除循环中Cys C的唯一场所，肾小管不分泌Cys C，因而血清Cys C浓度主要由GFR决定，并且不受心别、年龄、炎症反应、肿瘤、肌肉活动、饮食摄入等因素的影响。Cys C灵敏度高，与GFR相关性好。许多临床观察证实，当肾功能轻度受损，Scr变化不明显时，血清Cys C已增高，无论是轻度、中度、重度肾功能降低，其对应的血清Cys C值都显示良好的灵敏度。Cys C是迄今基本满足理想内源性GFR标志物要求的内源性物质，是最新发展起来的评估肾功能的一种敏感性好、特异性高的指标。

胶乳免疫比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的免疫比浊方法。基本原理是将待测物质相应抗体以特定方式交联到胶乳颗粒表面，当交联有抗体的胶乳颗粒与抗原结合后，会迅速聚集产生一定的浊度，改变反应液的透光性能。反应液透光性能的改变与抗原浓度具有相关性，可以反映待测物质中的抗原浓度。此方法可应用于全自动生化分析仪，且用时短，适于临床检测。

但是目前市售检测试剂盒在临床应用过程中，反应体系中抗体浓度一定时，随着抗原浓度的增加，抗原抗体复合物沉淀量增加，逐渐达到平衡，当抗原浓度过高时，将出现沉淀解聚甚至不沉淀的情况，即HOOK效应或抗原过剩现象，在免疫检测体系中，该现象将导致被测物浓度被低估甚至出现假阴性结果出现，可能导致误诊或漏诊。本领域技术人员根据大量的试验研究的经验，采用提高试剂灵敏度、抗体用量、稀释法调整抗体与抗原比例等方法，在一定程度上在检测试剂中延迟出现HOOK效应，即扩大抗原过剩检测范围。但是单纯提高试剂灵敏度的同时降低了试剂检测线性范围；调整抗体用量或稀释法调整抗体与抗原比例需要的研发周期长、研发工作量大且成本过高。

CN107894509A公布了一种提高胶乳免疫比浊法抗原过剩和线性范围的方法，主要是采用多次错流过滤的方式，以氯化锂为调节剂，十二烷基苯磺酸钠（SDBS）为乳化剂，过硫化钾为引发剂，直接对胶乳颗粒进行了二次收敛聚合改进。但是该方法过程需要循环错流过滤，操作复杂。本发明是在对该方法进行改进的基础上，对本发明试剂盒进行优化，扩大试剂线性检测和抗原过剩范围，提高对高浓度样本检测的准确性，有效地改善HOOK效应导致的被测物浓度被低估甚至出现假阴性结果。

发明内容