[发明专利]Baeyer-Villiger单加氧酶、突变体及其在制备中长链二元羧酸中的应用

权利要求书

1.一种Baeyer-Villiger单加氧酶，其特征在于，其是如下的蛋白质：

(1)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第56位天冬酰胺残基替换为亮氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质；

(2)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第141位丝氨酸替换为亮氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质；

(3)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第257位苯丙氨酸替换为谷氨酰胺残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质；

(4)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第310位丙氨酸替换为半胱氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质；

(5)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第313位苏氨酸替换为缬氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质；

(6)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第141位丝氨酸残基替换为亮氨酸残基，第257位苯丙氨酸残基替换为谷氨酰胺残基，第310位丙氨酸残基替换为半胱氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质；

(7)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第56位天冬酰胺残基替换为亮氨酸残基，第141位丝氨酸残基替换为亮氨酸残基，第257位苯丙氨酸残基替换为谷氨酰胺残基，第310位丙氨酸残基替换为半胱氨酸残基，第313位苏氨酸残基替换为缬氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质。

2.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码如权利要求1所述Baeyer-Villiger单加氧酶。

3.一种包含如权利要求2所述核酸的重组表达载体。

4.一种包含如权利要求3所述重组表达载体的重组表达转化体。

5.一种Baeyer-Villiger单加氧酶的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：培养如权利要求4所述的重组表达转化体，获得重组表达的Baeyer-Villiger单加氧酶。

6.一种如权利要求1项所述Baeyer-Villiger单加氧酶作为催化剂在制备α,ω-二元羧酸中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)使用如权利要求1所述的Baeyer-Villiger单加氧酶作为催化剂，催化底物长链酮酸或长链酮酯氧化制备酯酸或二酯；

(2)提取步骤(1)获得的酮酯或二酯，在碱溶液中进行酯水解反应，生成α,ω-二元羧酸。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述长链酮酸或长链酮酯具有以下通式：

其中，所述的长链酮酸如式1所示，其中：m＝5-9，n＝7-8；

所述的长链酮酯如式2所示，其中：m＝5-9，n＝7-8,R为-CH₃或者-C₂H₅。

8.如权利要求6或7所述的应用，其特征在于：所述步骤(1)使用如权利要求1所述的Baeyer-Villiger单加氧酶催化长链酮酸或长链酮酯进行区域选择性氧化反应，同时NADPH氧化生成NADP⁺。

9.如权利要求6或7所述的应用，其特征在于：所述步骤(1)中，耦联葡萄糖脱氢酶催化的葡萄糖脱氢反应，将NADP⁺酶法还原再生为NADPH。

10.如权利要求4所述重组表达转化体作为催化剂在制备α,ω-二元羧酸中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)使用如权利要求4所述重组表达转化体作为催化剂，催化底物长链酮酸或长链酮酯氧化制备酯酸或二酯；

(2)提取步骤(1)获得的酮酯或二酯，在碱溶液中进行酯水解反应，生成α,ω-二元羧酸。