[发明专利]一种植物中磺胺类抗生素提取与测定的方法

说明书

本发明公开了一种植物中磺胺类抗生素提取与测定的方法，具体步骤为：将预处理后的植物样品加入甲醇/盐酸混合提取液，依次经过超声、震荡和离心过程后，收集上清液，待用；然后在残渣中继续加入丙酮，依次经过超声、涡旋和离心过程后，收集上清液；将上述收集的上清液通过固相萃取柱分离，洗脱液为甲醇，收集的洗脱液经氮气吹干后用甲醇溶解；利用高效液相色谱测定甲醇溶解液中的磺胺类抗生素含量。本发明克服了现有植物中磺胺类抗生素残留的研究存在回收率低、试验过程繁琐、检出限较低的问题，提供了一种快捷、精确、高效的植物中磺胺类抗生素提取与检测的方法。

技术领域

本发明属于环境技术领域，具体涉及一种植物中磺胺类抗生素提取与测定的方法。

背景技术

磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。长期以来，磺胺类抗生素被大量用于人和动物的防病治病，同时添加于动物饲料中以提高饲料利用率和促进动物生长。大量使用的抗生素大部分以药物原形随粪尿排出，不断进入生态环境，成为新型重要环境污染物，对生态环境和人体健康构成严重威胁。当含有这些抗生素的畜禽粪便施用到农田后，就会造成抗生素在土壤中的残留。此外，抗生素在污水处理厂的去除率并不高，导致大量抗生素进入地表水，造成河流抗生素污染，并可能通过灌溉水进入农业土壤。抗生素水溶性较高，在土壤中的抗生素很容易被植物吸收累计，那么长期通过食物链摄入低浓度抗生素会对人体健康构成严重威胁。目前国内外对于磺胺类抗生素残留的研究主要集中在肉、蛋、奶等动物源食品方面，对于植物中磺胺类抗生素的污染调查研究鲜有报道，仅有的几种方法主要参照动物源食品中磺胺类抗生素的提取与测定，容易造成磺胺类抗生素回收率低；另外这些方法普遍存在试验过程繁琐、检出限较低的问题。

发明内容

本发明为了克服现有植物中磺胺类抗生素残留的研究存在回收率低、试验过程繁琐、检出限较低的问题，提供了一种快捷、精确、高效的植物中磺胺类抗生素提取与检测的方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种植物中磺胺类抗生素提取与测定的方法，包括如下步骤：

步骤一、两次多步提取：称取液氮研磨处理过的植物样品于玻璃离心管中，加入甲醇/盐酸混合提取液，超声、涡旋、离心、后收集上清液，固相残渣中再加入丙酮提取液，超声、涡旋、离心后收集上清液，合并两次的上清液待用；

步骤二、固相萃取：将步骤一所得的上清液通过事先用甲醇和超纯水活化的Waters Oasis HLB固相萃取柱，再用甲醇洗脱固相萃取柱，收集全部洗脱液，最后将洗脱液在水浴下用氮气吹干，再加入甲醇溶解，溶液过滤膜后收集待测；

步骤三、色谱测定：通过高效液相色谱仪对步骤二过滤后的样品进行含量分析；

其中，甲醇/盐酸混合提取液中甲醇与盐酸的体积比为80:20-95:5。

本发明进一步改进方案为：

所述磺胺类抗生素为磺胺嘧啶，磺胺甲基嘧啶，磺胺-5-甲氧嘧啶，磺胺甲恶唑和磺胺间二甲氧嘧啶。

所述步骤一、称取0.5-1.0g液氮研磨处理过的植物样品于30mL玻璃离心管中，加入10mL甲醇/盐酸混合提取液，超声10-30min，涡旋2-5min，离心（4000r/min）10-30min后收集上清液，然后固相残渣中再加入10mL丙酮提取液，超声10-30min，涡旋2-5min，离心（4000r/min）10-30min后收集上清液，合并两次的上清液待用。

所述步骤二、将步骤一所得的上清液通过事先用5mL甲醇和5mL超纯水活化的Waters Oasis HLB（6mL，500mg）固相萃取柱，再用5mL甲醇洗脱固相萃取柱，洗脱液速率2mL/min，收集全部洗脱液，最后将洗脱液在25-40度水浴下用氮气吹干，然后加入2mL甲醇溶解，溶液过0.45或0.22μm滤膜后收集于样品瓶中待测。