[发明专利]一种植物中磺胺类抗生素提取与测定的方法

权利要求书

1.一种植物中磺胺类抗生素提取与测定的方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤一、两次多步提取：称取液氮研磨处理过的植物样品于玻璃离心管中，加入甲醇/盐酸混合提取液，超声、涡旋、离心后收集上清液，固相残渣中再加入丙酮提取液，超声、涡旋、离心后收集上清液，合并两次的上清液待用；

步骤二、固相萃取：将步骤一所得的上清液通过事先用甲醇和超纯水活化的WatersOasis HLB固相萃取柱，再用甲醇洗脱固相萃取柱，收集全部洗脱液，最后将洗脱液在水浴下用氮气吹干，再加入甲醇溶解，溶液过滤膜后收集待测；

步骤三、色谱测定：通过高效液相色谱仪对步骤二过滤后的样品进行含量分析；

其中，甲醇/盐酸混合提取液中甲醇与盐酸的体积比为80:20-95:5；

所述磺胺类抗生素为磺胺嘧啶，磺胺甲基嘧啶，磺胺-5-甲氧嘧啶，磺胺甲恶唑和磺胺间二甲氧嘧啶；

所述高效液相色谱条件为：采用Waters2695高效液相色谱仪，波长为260-270nm；色谱柱选用250mm×4.6mm，5.0μm的Phenomenex Gemini C18色谱柱；流动相为甲醇和0.5%乙酸，柱温35℃，流速1mL/min，进样量20μL，梯度洗脱条件：0min，甲醇:0.5%乙酸体积比为10:90，15min，甲醇:0.5%乙酸体积比为30:70。

2.根据权利要求1所述的一种植物中磺胺类抗生素提取与测定的方法，其特征在于：所述步骤一、称取0.5-1.0g液氮研磨处理过的植物样品于30mL玻璃离心管中，加入10mL甲醇/盐酸混合提取液，超声10-30min，涡旋2-5min，以4000r/min的转速离心10-30min后收集上清液，然后固相残渣中再加入10mL丙酮提取液，超声10-30min，涡旋2-5min，以4000r/min的转速离心10-30min后收集上清液，合并两次的上清液待用。

3.根据权利要求1所述的一种植物中磺胺类抗生素提取与测定的方法，其特征在于：所述步骤二、将步骤一所得的上清液通过事先用5mL甲醇和5mL超纯水活化的6mL/500mg的Waters Oasis HLB固相萃取柱，再用5mL甲醇洗脱固相萃取柱，洗脱液速率2mL/min，收集全部洗脱液，最后将洗脱液在25-40℃水浴下用氮气吹干，然后加入2mL甲醇溶解，溶液过0.45μm或0.22μm滤膜后收集于样品瓶中待测。