[发明专利]一种离体诱导平陆百合多倍体的方法

说明书

本发明涉及一种离体诱导平陆百合多倍体的方法，包括百合鳞茎的预培养、诱导培养基的配制、诱导多倍体、培养诱导后鳞茎、诱导鳞茎生根、倍性鉴定，本发明方法以平陆食用百合脱毒试管鳞茎为材料，经诱导剂二甲戊灵或氟乐灵诱导处理，获得四倍体百合。本发明经过染色体加倍的多倍体百合具有植株鳞片肥厚、健壮、高产优质等特点，本发明方法利用诱导剂二甲戊灵或氟乐灵，获得了四倍体百合，提高了百合的质量和产量，进一步提高了其营养价值和经济效益。

技术领域

本发明涉及食用百合的多倍体的诱导，特别是涉及一种针对平陆百合的多倍体的诱导方法。

背景技术

山西平陆百合栽培历史悠久，质量好，营养价值高，以个头大、瓣肉厚、后味不苔、瓣肉无柴而著称于世，有“中条参”的美称。平陆百合含有大量蛋白质、脂肪、淀粉、维生素，并含有少量钙、磷、铁等，药用价值高，具有补中益气，温肺止咳，安神、清心之功效，具有很高的食用价值和商业价值。长期的无性繁殖导致平陆百合繁殖率低、病毒积累、品种退化等，使其难以满足市场所需。

多倍体育种是缩短育种年限和种质创新的重要途径，秋水仙素是常用的多倍体诱变剂，由于使用单一秋水仙素在多倍体诱导过程中易造成染色体缺失，形成嵌合体，使得多倍体诱导率降低。二硝基苯胺类除草剂如二甲戊灵与氟乐灵对植物微管蛋白有很强的结合力, 能有效阻止植物微管的聚合,诱导染色体加倍。

中国专利201610472915.1公开了一种新铁炮百合四倍体的诱导方法，其以鳞片为材料，用秋水仙素进行四倍体诱导，其鳞片经诱导后再生鳞茎步骤较为繁杂。

发明内容

本发明的目的是提供一种离体诱导平陆百合多倍体的方法，鳞茎死亡率低，诱变率高，提高了百合的质量和产量，进一步提高了其营养价值和经济效益。

本发明提供的离体诱导平陆百合多倍体的方法包括百合鳞茎的预培养、诱导培养基的配制、诱导多倍体、培养诱导后鳞茎、诱导鳞茎生根、倍性鉴定，具体步骤如下：

1)、百合鳞茎的预培养：

以平陆百合试管鳞茎为外植体，接种于MS＋0.8mg·L^-1 6-BA＋0.1mg·L^-1 NAA＋30g·L^-1蔗糖＋6g·L^-1琼脂的培养基中预培养40d；

2)、诱导培养基的配制：

在培养基MS＋0.8mg·L^-1 6-BA＋0.1mg·L^-1 NAA＋30g·L^-1蔗糖＋6g·L^-1琼脂中添加诱导剂至浓度为200μmo·L^-1，高压灭菌备用，所述诱导剂为二甲戊灵或氟乐灵；

3)、诱导多倍体：

将步骤1)所述预培养后的鳞茎剥去外面一层鳞片后接种于步骤2)所述培养基中进行诱导处理21d，得到诱导后的鳞茎；

4）培养诱导后鳞茎

将步骤3)所述诱导后的鳞茎剥去外面一层鳞片接种于MS + 0.2～1 mg/L 6-BA +0.1～0.5mg/L NAA + 60～100 g·L^-1蔗糖培养基中，诱导鳞茎生长得到再生植株；

5)、诱导鳞茎生根：

将步骤4）培养获得的百合鳞茎接种于1/2MS＋0.8mg·L^-1 NAA＋90g·L^-1蔗糖＋6g·L^-1琼脂+400mg·L^-1纳米碳培养基中进行生根培养，诱导鳞茎生根；

6)、倍性鉴定：