[发明专利]一种离体诱导平陆百合多倍体的方法

权利要求书

1.一种离体诱导平陆百合多倍体的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)、百合鳞茎的预培养：

以平陆百合试管鳞茎为外植体，接种于MS＋0.8mg·L^-1 6-BA＋0.1mg·L^-1 NAA＋30g·L^-1蔗糖＋6g·L^-1琼脂的培养基中预培养40d；

2)、诱导培养基的配制：

在培养基MS＋0.8mg·L^-1 6-BA＋0.1mg·L^-1 NAA＋30g·L^-1蔗糖＋6g·L^-1琼脂中添加诱导剂至浓度为200μmo·L^-1，高压灭菌备用，所述诱导剂为二甲戊灵或氟乐灵；

3)、诱导多倍体：

将步骤1)所述预培养后的鳞茎剥去外面一层鳞片后接种于步骤2)所述培养基中进行诱导处理21d，得到诱导后的鳞茎；

4）培养诱导后鳞茎

将步骤3)所述诱导后的鳞茎剥去外面一层鳞片接种于MS + 0.2～1 mg/L 6-BA + 0.1～0.5mg/L NAA + 60～100 g·L^-1蔗糖培养基中，诱导鳞茎生长得到再生植株；

5)、诱导鳞茎生根：

将步骤4）培养获得的百合鳞茎接种于1/2MS＋0.8mg·L^-1 NAA＋90g·L^-1蔗糖＋6g·L^-1琼脂+400mg·L^-1纳米碳培养基中进行生根培养，诱导鳞茎生根；

6)、倍性鉴定：

取步骤5）的生根根尖约2mm，经饱和对二氯苯预处理2-3h，于4℃卡诺氏固定液固定24h，清水洗净，1mol·L^-1盐酸60℃下解离18-25min，清水洗净，用卡宝品红染色10-15min后压片、镜检，得到完整的百合四倍体，所述固定液为无水乙醇∶冰醋酸按3:1的比例配制而成。

2.根据权利要求1所述的平陆百合多倍体的诱导方法，其特征是所述二甲戊灵为330g/L二甲戊灵乳油，氟乐灵为480g/L氟乐灵乳油。

3.根据权利要求1所述的平陆百合多倍体的诱导方法，其特征是所述步骤1)～5)的培养过程均在温度25 ±1℃，光周期14h/d，照强度为2000～3000Lx的培养条件下进行。