[发明专利]检测碱性磷酸酶活性以及碱性磷酸酶抑制剂浓度的方法

说明书

本发明提供了一种检测碱性磷酸酶活性的方法，其包括如下步骤：A1：将三(羟甲基)氨基甲烷、焦磷酸盐混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的碱性磷酸酶，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入醋酸缓冲液、CeO₂纳米粒子和3,3',5,5'‑四甲基联苯胺，在22～47℃下孵育后，分别进行紫外‑可见吸收光谱的测量，得到碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程；A2：将待测碱性磷酸酶按照步骤A1的操作进行紫外‑可见吸收光谱的测量，得到ΔA，将ΔA代入步骤A1中得到的碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程，计算出待测碱性磷酸酶的活性。本发明具有如下的有益效果：1、本发明所利用的CeO₂纳米粒子在水溶液中分散较好；2、本发明所提出方法检测时间短。

技术领域

本发明涉及一种检测碱性磷酸酶活性以及碱性磷酸酶抑制剂浓度的方法，属于分析测试技术领域。

背景技术

谭等人利用Cu-MOFs类过氧化物酶活性实现了碱性磷酸酶的检测(AnalyticaChimicaActa,2018,1004,74)。具体检测步骤：首先，将PPi及不同浓度ALP置于37℃恒温孵育40分钟；然后向溶液中依次加入Cu-MOFs、过氧化氢、ABTS及HEPES缓冲溶液，混合均匀后后置于37℃恒温孵育50分钟进行紫外-可见吸收光谱测试。该方法需要制备的Cu-MOFs分散性较差，检测时间较长，同时需要使用不稳定的过氧化氢用于氧化过氧化物酶底物。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种检测碱性磷酸酶活性以及碱性磷酸酶抑制剂浓度的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种检测碱性磷酸酶活性的方法，其包括如下步骤：

A1：将三(羟甲基)氨基甲烷、焦磷酸盐混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的碱性磷酸酶，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入醋酸缓冲液、CeO₂纳米粒子和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，在22～47℃下孵育后，分别进行紫外-可见吸收光谱的测量，得到碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程；

A2：将待测碱性磷酸酶按照步骤A1的操作进行紫外-可见吸收光谱的测量，得到ΔA，将ΔA代入步骤A1中得到的碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程，计算出待测碱性磷酸酶的活性。

作为优选方案，所述三(羟甲基)氨基甲烷的pH值为7.4，焦磷酸盐的浓度为0.07mM，CeO₂纳米粒子的浓度为0.05～0.30mg/mL，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.1～0.9mM。

作为优选方案，所述孵育时间不超过9min。

作为优选方案，所述醋酸缓冲液的pH值为3.6～5.6。

一种检测正钒酸钠浓度的方法，其包括如下步骤：

B1：将三(羟甲基)氨基甲烷、碱性磷酸酶混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的正钒酸钠，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入焦磷酸盐，在22～47℃下孵育后，加入醋酸缓冲液、CeO₂纳米粒子和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，在22～47℃下孵育后，分别进行紫外-可见吸收光谱的测量，以正钒酸钠对碱性磷酸酶的抑制效率和正钒酸钠的浓度作图，得到正钒酸钠浓度与正钒酸钠对碱性磷酸酶的抑制效率的关系方程；

B2：将待测正钒酸钠按照步骤B1的操作进行紫外-可见吸收光谱的测量，计算得到抑制效率值，将抑制效率值代入步骤B1中得到的正钒酸钠浓度与正钒酸钠对碱性磷酸酶的抑制效率的关系方程，计算出待测正钒酸钠的浓度。