[发明专利]检测碱性磷酸酶活性以及碱性磷酸酶抑制剂浓度的方法

权利要求书

1.一种检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A1：将三(羟甲基)氨基甲烷、焦磷酸盐混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同活性的碱性磷酸酶，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入醋酸缓冲液、CeO₂纳米粒子和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，在22~47℃下孵育后，分别进行紫外-可见吸收光谱的测量，得到碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程；ΔA为没有碱性磷酸酶和有碱性磷酸酶的条件下紫外-可见吸收峰强度的变化；

A2：将待测碱性磷酸酶按照步骤A1的操作进行紫外-可见吸收光谱的测量，得到ΔA，将ΔA代入步骤A1中得到的碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程，计算出待测碱性磷酸酶的活性。

2.如权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述三(羟甲基)氨基甲烷的pH值为7.4，焦磷酸盐的浓度为0.07 mM，CeO₂纳米粒子的浓度为0.05~0.3 mg/mL，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.1~0.9 mM。

3.如权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述在22~47℃孵育时间不超过9 min。

4.如权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述醋酸缓冲液的pH值为3.6~5.6。

5.一种检测正钒酸钠浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：

B1：将三(羟甲基)氨基甲烷、碱性磷酸酶混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的正钒酸钠，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入焦磷酸盐，在37℃下孵育后，加入醋酸缓冲液、CeO₂纳米粒子和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，在22~47℃下孵育后，分别进行紫外-可见吸收光谱的测量，以正钒酸钠对碱性磷酸酶的抑制效率和正钒酸钠的浓度作图，得到正钒酸钠浓度与正钒酸钠对碱性磷酸酶的抑制效率的关系方程；

B2：将待测正钒酸钠按照步骤B1的操作进行紫外-可见吸收光谱的测量，计算得到抑制效率值，将抑制效率值代入步骤B1中得到的正钒酸钠浓度与正钒酸钠对碱性磷酸酶的抑制效率的关系方程，计算出待测正钒酸钠的浓度。

6.如权利要求5所述的检测正钒酸钠浓度的方法，其特征在于，在步骤B1的混合后，所述焦磷酸盐的浓度为0.07 mM，CeO₂纳米粒子的浓度为0.25 mg/mL，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.5 mM，在步骤B1的混合前，三(羟甲基)氨基甲烷的pH值为7.4，醋酸缓冲液的pH值为4.0。