[发明专利]一种基于重组核受体蛋白的生物效应物质高通量筛查鉴定方法

权利要求书

1.一种基于重组核受体蛋白的生物效应物质筛查鉴定方法，其步骤包括：

将带标签的选定重组核受体蛋白与待测环境介质混合，使上述重组核受体蛋白结合环境介质中的生物效应物质；

将结合生物效应物质的重组核受体蛋白固定到磁珠载体上；

洗脱得到核受体蛋白与生物效应物质的混合物；

对混合物进行液液萃取得到样品；

采用不表达上述重组核受体蛋白的空载体蛋白，基于上述同样过程得到对照；

筛选样品与对照之间的差异化合物；

通过化学数据库和质谱数据库搜索以鉴定上述差异化合物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对差异物质的筛选采用的多元统计方法包括主成分分析和正交偏最小二乘判别分析，根据变量重要性因子VIP、非参数T检验、样品组与对照组峰面积倍数关系(fold change)来筛选上述差异化合物，筛选条件为：VIP1,p0.05,fold change1和VIP1,p0.05,fold change10。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过在线化学数据库EPA Toxcast结合质谱数据库对上述差异化学物的结构进行搜库鉴定，搜库鉴定的限制条件为：一级精确质量数小于5ppm，二级碎片质量数小于5ppm，同位素相似度大于80％，元素组成限制为C：0-100；H：0-150；O：0-40；N：0-20；P：0-10；S：0-10；Br：0-30；Cl：0-30；F：0-30，所述质谱数据库包括mzCloud质谱数据库和本地质谱库。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述重组核受体蛋白包括：AR,ERα,ERβ,ERγ,PR,GR,ERR,PPARα,PPARδ,PPARγ,RXRα,RXRβ,RXRγ,RARα,RARβ,RARγ,TRα,TRβ,VDR,PXR,CAR,LXRα,LXRβ,FXR,AhR重组核受体蛋白。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，重组核受体蛋白是带有组氨酸(His)标签的人核受体蛋白，所述磁珠为Ni²⁺鳌合的磁珠。