[发明专利]一种提高聚苹果酸产量的发酵方法

权利要求书

1.一种提高聚苹果酸产量的发酵方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)将菌株活化培养后，制得种子液；

(2)将所得种子液以10v/v％的量接于发酵罐中进行发酵培养，第一阶段发酵：通风比0.8-0.9vvm，发酵至40—48h；第二阶段发酵：通风比为1.1-1.2vvm，发酵至90—96h；第三阶段发酵：通风比为1.0-0.9vvm，发酵至144-148h；

发酵培养时，搅拌速度500r/min，罐压为0.1MPa，发酵温度为25℃；

出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)于2009年10月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种编号CGMCC No.3337。

2.根据权利要求1所述的一种提高聚苹果酸产量的发酵方法，其特征在于，制得种子液的具体步骤为：将出芽短梗霉菌株活化2～3h，然后用无菌生理盐水洗下斜面菌株的孢子，制备孢子悬浮液；按照10v/v％的接种量将孢子悬液转接到含有100mL种子培养基的500mL的挡板瓶中进行培养，培养温度25℃，摇床转速为180-200r/min，培养时间为36-42h。

3.根据权利要求2所述的一种提高聚苹果酸产量的发酵方法，其特征在于，种子培养基组成为：蔗糖120-140g/L，酵母膏2.5-3g/L，硫酸铵0.7-1g/L，丁二酸1.6-2g/L，玉米浆0.08-0.1v/v，K₂CO₃ 0.2-0.4g/L，MgSO₄·7H₂O 0.08-0.1g/L，KH₂PO₄ 0.8-1g/L，ZnSO₄·7H₂O0.03-0.05g/L，其余为蒸馏水。

4.根据权利要求1所述的一种提高聚苹果酸产量的发酵方法，其特征在于，发酵培养的具体步骤为：接种口在火焰保护下，将所得种子液以10v/v％的量接于装有3L发酵液的5L发酵罐中进行发酵培养。

5.根据权利要求4所述的一种提高聚苹果酸产量的发酵方法，其特征在于，发酵培养基为：蔗糖160-180g/L，蛋白胨30-35g/L，KH₂PO₄ 0.08-0.1g/L，NaNO₃ 1.7-2g/L，MgSO₄·7H₂O0.2-0.3g/L，KCl 0.3-0.5g/L，MnSO₄0.03-0.05g/L，其余为蒸馏水。