[发明专利]一种血清中HBV DNA的实时荧光定量检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种血清中HBV DNA的实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于：

所述的实时荧光定量检测试剂盒包括：

乙型肝炎病毒HBV的检测引物组；

乙型肝炎病毒HBV的检测探针；

和裂解液；

所述的裂解液包括5％-25％(V/V)的多果定、5-10％(V/V)Tween-20、10-50mM柠檬酸钠和10-100mM NaCl。

2.如权利要求1所述的实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于：

所述的乙型肝炎病毒HBV的检测引物组为引物组A或引物组B；

所述的引物组A由以下引物序列组成：

引物序列1：GGCAACGGCCTGGTCTGTGCCAAGTGT，

引物序列2：GGCAACGGTCAGGTCTCTGCCAAGTGT，

引物序列3：TGACGCAACCCCCACTG，

引物序列4：GCTGCGAGCAAAACAAG，

引物序列5：GCGCAGGATCCAGTTGGCAGCACA，

引物序列6：GTCCCGCGCAGGATCCAGTTGGCAGC；

所述的引物组B由以下引物序列组成：

引物序列7：GCCGACAGTATCTGAACCTTTACCCCGTTG，

引物序列8：GCAACGGTCAGGTCTGTGCCAAGTGTTT，

引物序列9：GCTGACGCAACCCCCAC，

引物序列10：CGGCTGCGAGCAAAACA，

引物序列11：CCGCGCAGGATCCAGTTGGCAGCACA，

引物序列12：CCCGCGCAGGATCCAGTTGGCAGCAC。

3.如权利要求1所述的实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于：

所述的乙型肝炎病毒HBV的检测探针为以下四条探针序列中的任意一条：

探针序列1：CCGATCCATACTGCGGAACT，

探针序列2：CCGATCCATACTGCGGAAC，

探针序列3：GCCGATCCATACTGCGGAACT，

探针序列4：GCCGATCCATACTGCGGAAC；

所述的乙型肝炎病毒HBV的检测探针序列5’端标记的荧光基团为FAM、HEX、VIC、CY5、TET中一种，探针序列3’端标记的淬灭基团为TAMRA、MGB、BHQ中一种。

4.如权利要求1所述的实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于：

所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括内控探针和内控引物组；

所述的内控探针的核苷酸序列为：

内控探针序列5：ATGCCCTCCCCCATGCCATCCT；或者为其核苷酸互补序列；

内控探针序列所标记的荧光基团可从FAM、HEX、VIC、CY5、TET选择，但不同于权利要求3所述探针的荧光基团；

所述的内控引物组的核苷酸序列为：

内控引物序列13：CGGGGTCACCCACACTGTGCCCATCTACG，

内控引物序列14：GGTCACCCACACTGTGCCCATCTACG，

内控引物序列15：CCACACTGTGCCCATCTACGA，

内控引物序列16：GCGCTCGGTGAGGATCTTC。

5.如权利要求1所述的实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于：

所述的试剂盒还包括PCR反应液，所述的PCR反应液包括：15-25mM Tris-HCl pH8.0，15-25mM KCl，2.5-5Mm (NH₄)SO₄，2-5mM MgCl₂，0.5-2mM dNTP/UTP Mix。

6.如权利要求1所述的实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于：

所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括强阳性对照品、临界阳性对照品、阴性对照品和阳性定量参考品中的一种或多种。