[发明专利]一株副氧化微杆菌及其广谱多氯联苯酶制剂的制备方法与应用

权利要求书

1.一株副氧化微杆菌（Microbacterium paraoxydans）ECO-2，2018年06月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号CGMCC No. 15836。

2.权利要求1所述副氧化微杆菌（Microbacterium paraoxydans）ECO-2的培养方法，其特征在于，步骤如下：

（1）取副氧化微杆菌（Microbacterium paraoxydans）ECO-2菌株划线于固体活化培养基上，活化培养，制得活化后菌株；

（2）取步骤（1）制得的活化后菌株接种至液体培养基中，摇床培养，制得种子液；

（3）取步骤（2）制得的种子液，按体积百分比2%～10%转接至扩大培养基中，扩大培养，制得菌液。

3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（1）中，固体活化培养基为LB固体培养基，组份如下：

蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂20g，水定容至1L，pH自然。

4.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（1）中，活化条件为：28～37℃倒置培养1～2天。

5.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（2）中的液体培养基与步骤（3）中的扩大培养基均为LB液体培养基，组份如下：

蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，水定容至1L，pH自然。

6.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（2）中的摇床培养条件为：28～37℃转速为100～200转/分钟的条件下，摇床培养1～2天。

7.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（3）中的扩大培养条件为：28～37℃、溶氧20～70%的条件下，扩大培养1～2天。

8.权利要求1所述副氧化微杆菌（Microbacterium paraoxydans）ECO-2在制备修复多氯联苯污染土壤酶制剂中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤如下：

（i）取副氧化微杆菌（Microbacterium paraoxydans）ECO-2的菌液，按1～10%的体积百分比接种于无机盐诱导培养基中，在温度为28～37℃、转速为100～200转/分钟的条件下，诱导培养3～5天，制得诱导后副氧化微杆菌（Microbacterium paraoxydans）ECO-2菌液；

所述无机盐诱导培养基为含有浓度0.3～0.8g/L联苯的无机盐培养基；

（ii）取步骤（i）制得的诱导后副氧化微杆菌（Microbacterium paraoxydans）ECO-2菌液，固液分离，取菌体，悬浮于磷酸缓冲液，经细胞破碎，4～25℃条件下固液分离，取上清，制得酶制剂。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述步骤（i）中，无机盐培养基每升组份如下：

磷酸二氢钾0.5g，磷酸氢二钠0.5g，硫酸镁0.2g，氯化钙0.1g，氯化钠0.2g，硫酸铵1.0g，蛋白胨2.0g，pH7.0。

11.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述步骤（ii）中，固液分离为在3000～10000转/分钟的条件下，离心2～10分钟。

12.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述步骤（ii）中，细胞破碎采用高压均质细胞破碎。