[发明专利]一种α1- 抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡及其制备方法

权利要求书

1.一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，包括盒体，其特征在于：所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条α1-抗胰蛋白酶抗体检测区T线和一条质控区C线，所述α1-抗胰蛋白酶抗体检测区T线与质控区C线平行排列。

2.根据权利要求1所述的一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，其特征在于：所述包被膜两端分别与吸水垫和抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫相互交叠连接，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫上压贴有样品垫，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物表面设有修饰活性基团；所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物为量子点、镧系稀土络合物、纳米荧光微球或有色纳米颗粒，所述量子点为CdSe、ZnS；所述镧系稀土络合物为Eu (TTA) 3Phen；所述纳米荧光微球为聚苯乙烯纳米荧光微球；所述有色纳米颗粒为胶体金、有色聚苯乙烯微球。

3.根据权利要求1所述的一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维样品垫；所述包被膜为硝酸纤维素膜；所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫为玻璃纤维或聚酯纤维。

4.一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述方法包括样品垫、抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫与包被膜的制备方法。

5.根据权利要求4所述的一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫包括量子点标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体、稀土络合物标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体、聚苯乙烯纳米荧光微球标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体、有色聚苯乙烯微球标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体和胶体金标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体。

6.根据权利要求5所述的一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点与稀土络合物标记垫的制备步骤为：

①用标记缓冲液将水溶性羧基量子点、镧系稀土络合物溶解；

②在量子点、镧系稀土络合物溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液，室温反应1～2小时，超滤除去未反应的化学物质后加入标记缓冲液；

③将抗α1-抗胰蛋白酶抗体加入上述活化的量子点、镧系稀土络合物溶液中，室温偶联反应1～2小时，加入封闭液反应30～60min，超滤除去未反应的化学物质后加入抗体保存液，即可得抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记溶液；

④将上述所得的抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记垫；

所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记垫的制备步骤为：

①用标记缓冲液将羧基聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球稀释至固含量约0.2%；

②在上述聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球溶液中加入EDC溶液和sulfo-NHS溶液，活化10～20min，高速离心30min，去上清后加入适量抗α1-抗胰蛋白酶抗体溶液，混合偶联反应1～2h；

③将聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球溶液与抗α1-抗胰蛋白酶抗体偶联溶液，加入封闭液反应30～60min，高速离心20min，去上清，加入抗体保存液即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记溶液；

④将上述所得的标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记垫；

所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体胶体金标记垫的制备步骤为：

①制备粒径在 30nm左右的胶体金溶液；

②在磁力搅拌下，胶体金溶液中逐滴加入0.05 MK2CO3调节pH值为8.0～8.5，加入抗α1-抗胰蛋白酶抗体，减慢转速，充分混匀30min；按BSA终浓度质量比1%～2%，加入10％的BSA溶液进行封闭反应，充分混匀30min；

③在冷冻离心机中(4～10)℃、高速离心30min，弃上清，按原初始标记时所用胶体金溶液体积的40％～100％加入抗体保存液复溶，即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体胶体金标记溶液；

④ 将上述所得的标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体胶体金标记垫。