[发明专利]厚壳贻贝p-糖蛋ABCB1--一种新型海洋生物污染检测标记物

说明书

本发明公开了厚壳贻p‑糖蛋ABCB1，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1，本发明还公开一种新型海洋生物污染检测标记物，用厚壳贻贝作为检测海洋污染的生物样本，厚壳贻贝p‑糖蛋ABCB1用作海洋污染的检测标记物。本发明p‑糖蛋ABCB1通过基因克隆技术克隆获得，其在厚壳贻贝的消化腺和腮中p‑糖蛋ABCB1的相对表达量最高，其核心片段PCR扩用引物合适、能增大PCR反应的成功性；本发明利用ABCB1用作新型海洋生物污染检测标记物，该检测标记物特异性强，在分子水平上能够直接以生物体内靶细胞或靶分子为反应终点进行灵敏的生物学反应，对海洋污染物暴露和毒性效应有预警作用。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，尤其是涉及厚壳贻贝p-糖蛋ABCB1--一种新型海洋生物污染检测标记物。

技术背景

我国东海地区海域带处于海洋与陆地的过渡地带，陆地工农业生产、海洋产业开发等排放的废水多在此汇集。其中重金属、石油类(BAP)等污染物易通过吸附等作用结合到悬浮颗粒物或胶体表面而被沉淀富集，会对底栖生物产生较大的影响。有研究表明，生物组织中标志物活性（含量）与环境中污染物含量呈一定相关性，因此，研究东海海域沉积物中污染物的含量变化，能够为筛选生物标志物提供基础数据，同时有利于初步掌握不同区域的污染特征和来源，对于应用生物标志物法评价周围人类活动对海域环境的生态压力有重要作用。

厚壳贻贝（Mytilus coruscus）俗称海虹或淡菜，别称“东海夫人”，属软体动物门(Molusca)、瓣鳃纲(Lanelibranchia)、异柱目(Anisomyaria)、贻贝科(Mytidea)，是分布在西北太平洋沿岸内湾与岛礁的双壳类软体动物，日本北海道、朝鲜的济州岛、我国的黄渤海及东南沿海均有分布，我国的浙江、台湾资源较多，尤以舟山出产的最为出名。其近年来，随着工农业的迅猛发展，近海遭到不同程度的污染，特别是石油工业和海上交通运输业的发展，使得石油成为近海中最主要的污染物，石油污染不仅能使鱼、虾、贝类海产品变味，严重时能产生毒性效应，给海洋生态环境和渔业资源带了严重危害；同时，由于重金属易在底质中蓄积，不易降解，往往被生物富集，对人体健康具有潜在的威胁，重金属污染也是当今世界普遍关注的环境问题之一，重金属铜污染主要是由采矿排放出的废水和废气、城市工业和生活污水（包括一些钢铁、电子产品等）无节制的排放等致使水质中或土壤中重金属含量增加，导致重金属污染达到无法承受的地步，并造成生态环境的严重恶化，铜污染一直是重金属污染中的一个重要方面，铜污染越来越受到人们的重视。

P糖蛋白(P-gp)是ABC转运蛋白家族中的一员，其主要功能是利用ATP水解释放的能量将其底物泵出细胞外。P-gp是体内重要的转运蛋白，广泛的分布于肝脏、脑、肾脏、胃肠道等组织，参与多种物质的吸收、分布及排泄过程。同时，P-gp在各个组织过表达是人体产生多药耐药的主要因素。P-gp是由ABCB1基因编码的产物，ABCB1基因位于7号染色体q21.1，包含28个外显子。目前，已经报道的ABCB1基因的单核苷酸多态性(SNPs)超过了60种。这些转运蛋白在肝脏、肠道、肾脏和大脑等组织中表达出来，在各种各样的化合物的上升、分布和排泄中发挥了至关重要的作用。这些蛋白质作为细胞的第一道防线，在细胞的解毒过程中发挥着重要作用。目前还未有报道将厚壳贻贝p-糖蛋ABCB1用作新型海洋生物污染检测标记物。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种通过基因克隆技术克隆获得的厚壳贻贝p-糖蛋ABCB1，其在厚壳贻贝的消化腺和腮中p-糖蛋ABCB1的相对表达量最高，克隆用引物合适、能增大PCR反应的成功性。

本发明的目的之而在于提供一种利用厚壳贻贝p-糖蛋ABCB1用作新型海洋生物污染检测标记物，该检测标记物特异性强，在分子水平上能够直接以生物体内靶细胞或靶分子为反应终点进行灵敏的生物学反应，对海洋污染物暴露和毒性效应有预警作用。